仙方活命飲治療卡培他濱致手足綜合征的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)及構(gòu)建卡培他濱致手足綜合征的大鼠模型，揭示仙方活命飲對(duì)卡培他濱致手足綜合征治療作用及機(jī)理。首先體外培養(yǎng)人永生化表皮細(xì)胞（HACAT細(xì)胞），用氟尿嘧啶做細(xì)胞毒性試驗(yàn)，獲得細(xì)胞生存率50％時(shí)5-氟尿嘧啶(5-Fu)的最佳劑量為3.5μmmol，約1.8μL原液;在后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)中分別加入1.8μL5-FU藥液，1.8μL5-FU+不同劑量梯度的仙方活命飲藥液以及仙方活命飲藥液，24h后CCK8法（Cell Counting

2、Kit-8）檢測(cè)細(xì)胞生存率，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子含量。細(xì)胞生存率檢測(cè)結(jié)果顯示:加入1.8μL5-Fu后的細(xì)胞生存率約為正常的50％，在仙方活命飲藥液量為4μL時(shí)，細(xì)胞生存率達(dá)到高峰，當(dāng)添加1.8μL5-FU+4μL仙方活命飲藥液時(shí)，細(xì)胞的生存狀態(tài)最佳，生存率接近100％。細(xì)胞培養(yǎng)上清液細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果與正常細(xì)胞組相比顯示，細(xì)胞+1.8μL5-Fu組CNTF、PD-ECGF、CINC-3、IL-10、IL

3、-β表達(dá)量明顯增高;細(xì)胞+4μL中藥藥液組CINC-3、IL-10、CNTF表達(dá)量降低;細(xì)胞+5-Fu+4μL中藥藥液組PD-ECGF、IL-β降低，CINC-3、CNTF、IL-10明顯增高。
　　手足綜合征（Hand-foot syndrome，HFS）制模與評(píng)價(jià):選用SD雌性大鼠115只，按實(shí)驗(yàn)需求分為a、b、c、d、e、f六組，a組以200mg/kg/次，卡培他濱灌胃連續(xù)7天，2次/天，休息3天。b組在a組基礎(chǔ)上再灌胃7天

4、，方法同a組，c組400mg/kg/次，灌胃連續(xù)7天，2次/天，休息3天，連續(xù)2個(gè)周期。d、e組為去離子水組，f組為正常對(duì)照組。通過(guò)一般狀況評(píng)估，大鼠足跖部特征圖像對(duì)比，HE及天狼猩紅染色等方法對(duì)比綜合評(píng)價(jià)所建立手足綜合征模型。結(jié)果顯示a組HFS的發(fā)生率為40％，b組總的發(fā)病率可達(dá)到77.5％，c組的HFS發(fā)病率可達(dá)到80％。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，a組與b、c兩組相比HFS發(fā)病率存在顯著差異(p＜0.05)，但b組與c組相比HFS發(fā)病率無(wú)顯著差

5、異(p＞0.05)。b組建立模型狀態(tài)良好、造模成功率高(77.5％)、穩(wěn)定性好。
　　選用SD雌性大鼠150只，用200mg/kg/次卡培他濱的造模方法模擬不同劑量致HFS的模型，分為一周期模型（A組）和兩周期模型(B組)，然后將模型大鼠分別分為中藥內(nèi)服組(A1，B1)、中藥外用組(A2，B2)、尿素維E護(hù)膚霜外用組(A3，B3)、不給藥組(A4，B4)，干預(yù)時(shí)間為1周。不同時(shí)間點(diǎn)觀察足跖部皮膚變化，取大鼠后足跖部組織，病理切片、

6、HE染色、天狼猩紅染色、胸苷磷酸化酶(TP)免疫組化;留取大鼠血清，檢測(cè)部分細(xì)胞因子表達(dá)量。結(jié)果顯示A組各干預(yù)組間HFS好轉(zhuǎn)率差異不大，而B(niǎo)組中藥外用組HFS好轉(zhuǎn)率明顯高于其他各組。A1、A2、A3、A4局部皮損好轉(zhuǎn)大鼠與無(wú)效大鼠相比，各細(xì)胞因子濃度差異不明顯。B1、B2、B3、B4無(wú)效大鼠與好轉(zhuǎn)大鼠相比細(xì)胞因子表達(dá)(CNTF、PD-ECGF、CINC-3、IL-10、IL-β)各有差異，但CNTF表達(dá)量均相比較高，且B2（中藥外用組）

7、CINC-3、CNTF較其他組表達(dá)量降低。
　　A組HFS(+)干預(yù)后好轉(zhuǎn)大鼠、HFS(+)干預(yù)后無(wú)效大鼠、正常對(duì)照組大鼠間TP表達(dá)陽(yáng)性率無(wú)明顯差別(p＞0.05)，但各組TP表達(dá)陽(yáng)性率均大于A組HFS(-)大鼠(p＜0.05)。B組HFS(+)干預(yù)后好轉(zhuǎn)大鼠、HFS(+)干預(yù)后無(wú)效大鼠、正常對(duì)照組大鼠間無(wú)明顯差別(p＞0.05)，但各組TP表達(dá)陽(yáng)性率均大于B組HFS(-)大鼠(p＜0.05)。
　　本研究可得出以下結(jié)論:1

8、、仙方活命飲可促進(jìn)細(xì)胞修復(fù)，具有對(duì)抗5-FU造成的細(xì)胞損傷效應(yīng)的作用;2、200mg/kg/次，2/日卡培他濱灌胃，給藥2周期能夠建立質(zhì)量較高的卡培他濱誘導(dǎo)手足綜合征的大鼠模型;3、損傷-炎性反應(yīng)-損傷機(jī)制與HFS的發(fā)生密切相關(guān);4、仙方活命飲治療HFS具有良好療效，且外用較內(nèi)服療效更佳;5、CNTF可作為預(yù)測(cè)HFS發(fā)生及療效的指標(biāo);6、TP表達(dá)陽(yáng)性率高的大鼠更易發(fā)生HFS，仙方活命飲對(duì)于TP表達(dá)沒(méi)有影響;7、短時(shí)間、小劑量情況下出現(xiàn)H