小鼠博來(lái)霉素多次染毒肺纖維化模型建立及ABT263治療作用觀察.pdf

1、肺纖維化(pulmonary fibrosis，PF)是以炎癥和細(xì)胞外基質(zhì)沉積為特征，呈進(jìn)展性和致死性的彌漫性肺間質(zhì)疾病;由于疤痕引起肺結(jié)構(gòu)不可逆的破壞，造成通氣障礙，氣體交換受阻，患者因呼吸衰竭而死亡。其中特發(fā)性肺纖維化(Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是由未知原因引起的肺纖維化疾病，常見于55-75歲的中老年人，患者確診后的生存期只有2～6年，發(fā)病機(jī)制未闡明，缺乏有效的治療手段。
　　為探究

2、肺纖維化的發(fā)病機(jī)制及評(píng)價(jià)新藥的有效性，已建立多種肺纖維化動(dòng)物模型，如博來(lái)霉素(Bleomycin，BLM)、石棉、二氧化硅、輻射等方式誘導(dǎo)嚙齒類動(dòng)物模型。常用的是小鼠博來(lái)霉素單次染毒模型，能一定程度上模擬肺纖維化的一些相關(guān)特點(diǎn)，但是發(fā)病呈急性過(guò)程，與臨床發(fā)病不同。為此本課題首先比較了BLM多次氣管滴注染毒與單次染毒肺部及全身改變。將C57BL/6雄性小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、BLM單次染毒組、BLM多次染毒組，BLM單次染毒組染毒劑量為3.5

3、mg/kg，BLM多次染毒組BLM染毒濃度為0.4mg/ml，每只100ul，2周一次。在染毒2周、4周、8周時(shí)觀察三組小鼠的體重變化、外周血計(jì)數(shù)、臟器指數(shù)（肺、腎臟、胸腺、脾臟）、肺組織HE染色及肺組織羥脯氨酸含量等指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)BLM單次染毒模型小鼠在2w時(shí)病理評(píng)分最高，4w時(shí)評(píng)分降低，表明肺局部反應(yīng)減輕，BLM多次染毒模型小鼠肺病理評(píng)分相對(duì)穩(wěn)定，肺損傷持續(xù)存在;BLM多次染毒小鼠肺組織中的羥脯氨酸含量高于單次染毒小鼠;而兩組小

4、鼠的體重、外周血計(jì)數(shù)和對(duì)照組小鼠相比沒(méi)有差異，表明肺局部反應(yīng)BLM多次染毒模型優(yōu)于單次染毒模型，兩種染毒方式對(duì)小鼠的全身反應(yīng)不明顯。在此基礎(chǔ)上，建立小鼠BLM多次染毒模型，觀察肺組織病變變化規(guī)律，將小鼠分為對(duì)照組和模型組，模型組BLM染毒濃度為0.4mg/ml，每只100ul，2周一次，染毒8次，觀察肺指數(shù)、肺組織HE染色、Masson染色、肺組織SAβ-gal染色等指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型小鼠具有肺纖維化進(jìn)展不可逆，在16w時(shí)有衰老細(xì)胞

5、存在，提示細(xì)胞衰老與肺纖維化有一定關(guān)系。
　　ABT263是BCL-2和BCL-xL的抑制劑，前期研究發(fā)現(xiàn)ABT263對(duì)衰老細(xì)胞有選擇性毒性。為探討ABT263對(duì)BLM誘導(dǎo)肺纖維化的治療作用，課題的第二部分首先建立BLM誘導(dǎo)的A549細(xì)胞衰老模型，發(fā)現(xiàn)衰老A549細(xì)胞對(duì)ABT263的細(xì)胞毒性更為敏感，提示ABT263對(duì)衰老細(xì)胞具有選擇性清除作用。在此基礎(chǔ)上開展了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，利用BLM多次染毒肺纖維化模型觀察ABT-263對(duì)肺纖維化的

6、治療作用及探究其作用機(jī)制。將C57BL/6雄性小鼠分為四組:對(duì)照組(ctrl)、ABT給藥組(ABT)、模型組(BLM)、治療組(BLM+ABT)。在模型組小鼠BLM染毒8次后給藥，ABT給藥組和治療組小鼠給予ABT263，ABT263給藥劑量為50mg/kg·day，連續(xù)給藥5天，停藥兩周。ABT給藥兩個(gè)療程后取材觀察小鼠體重變化、肺指數(shù)、HE染色及評(píng)分、Masson染色、肺組織羥脯氨酸含量、外周血計(jì)數(shù)、SAβ-gal染色、BCL-2