小鼠博來霉素多次染毒肺纖維化模型建立及ABT263治療作用觀察.pdf

1、肺纖維化(pulmonary fibrosis，PF)是以炎癥和細胞外基質沉積為特征，呈進展性和致死性的彌漫性肺間質疾病;由于疤痕引起肺結構不可逆的破壞，造成通氣障礙，氣體交換受阻，患者因呼吸衰竭而死亡。其中特發(fā)性肺纖維化(Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是由未知原因引起的肺纖維化疾病，常見于55-75歲的中老年人，患者確診后的生存期只有2～6年，發(fā)病機制未闡明，缺乏有效的治療手段。
　　為探究

2、肺纖維化的發(fā)病機制及評價新藥的有效性，已建立多種肺纖維化動物模型，如博來霉素(Bleomycin，BLM)、石棉、二氧化硅、輻射等方式誘導嚙齒類動物模型。常用的是小鼠博來霉素單次染毒模型，能一定程度上模擬肺纖維化的一些相關特點，但是發(fā)病呈急性過程，與臨床發(fā)病不同。為此本課題首先比較了BLM多次氣管滴注染毒與單次染毒肺部及全身改變。將C57BL/6雄性小鼠隨機分為對照組、BLM單次染毒組、BLM多次染毒組，BLM單次染毒組染毒劑量為3.5

3、mg/kg，BLM多次染毒組BLM染毒濃度為0.4mg/ml，每只100ul，2周一次。在染毒2周、4周、8周時觀察三組小鼠的體重變化、外周血計數、臟器指數（肺、腎臟、胸腺、脾臟）、肺組織HE染色及肺組織羥脯氨酸含量等指標。實驗結果發(fā)現(xiàn)BLM單次染毒模型小鼠在2w時病理評分最高，4w時評分降低，表明肺局部反應減輕，BLM多次染毒模型小鼠肺病理評分相對穩(wěn)定，肺損傷持續(xù)存在;BLM多次染毒小鼠肺組織中的羥脯氨酸含量高于單次染毒小鼠;而兩組小

4、鼠的體重、外周血計數和對照組小鼠相比沒有差異，表明肺局部反應BLM多次染毒模型優(yōu)于單次染毒模型，兩種染毒方式對小鼠的全身反應不明顯。在此基礎上，建立小鼠BLM多次染毒模型，觀察肺組織病變變化規(guī)律，將小鼠分為對照組和模型組，模型組BLM染毒濃度為0.4mg/ml，每只100ul，2周一次，染毒8次，觀察肺指數、肺組織HE染色、Masson染色、肺組織SAβ-gal染色等指標。實驗結果發(fā)現(xiàn)模型小鼠具有肺纖維化進展不可逆，在16w時有衰老細胞

5、存在，提示細胞衰老與肺纖維化有一定關系。
　　ABT263是BCL-2和BCL-xL的抑制劑，前期研究發(fā)現(xiàn)ABT263對衰老細胞有選擇性毒性。為探討ABT263對BLM誘導肺纖維化的治療作用，課題的第二部分首先建立BLM誘導的A549細胞衰老模型，發(fā)現(xiàn)衰老A549細胞對ABT263的細胞毒性更為敏感，提示ABT263對衰老細胞具有選擇性清除作用。在此基礎上開展了體內實驗，利用BLM多次染毒肺纖維化模型觀察ABT-263對肺纖維化的

6、治療作用及探究其作用機制。將C57BL/6雄性小鼠分為四組:對照組(ctrl)、ABT給藥組(ABT)、模型組(BLM)、治療組(BLM+ABT)。在模型組小鼠BLM染毒8次后給藥，ABT給藥組和治療組小鼠給予ABT263，ABT263給藥劑量為50mg/kg·day，連續(xù)給藥5天，停藥兩周。ABT給藥兩個療程后取材觀察小鼠體重變化、肺指數、HE染色及評分、Masson染色、肺組織羥脯氨酸含量、外周血計數、SAβ-gal染色、BCL-2