CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化病程中的作用.pdf

1、文章從以下三部分就CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化病程中的作用進(jìn)行了綜述。
　　第一部分 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在小鼠肺纖維化病程中的變化
　　目的:探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4+CD25+regulatory T cells, Tregs)的變化與小鼠肺纖維化病程的關(guān)系。
　　方法:氣管內(nèi)灌注BLM制備PF模型,于造模后3、7、14、21和28天處死,采用HE和Mass

2、on染色檢測肺組織改變和膠原含量評價肺病變程度;采用ELISA法檢測外周血、肺泡灌洗液、脾和胸腺中IFN-γ和TGF-β1的含量評價PF病程中Th1/Th2反應(yīng);采用細(xì)胞流式檢測外周血和脾中CD4+CD25+Tregs比例的變化。
　　結(jié)果:①BLM組小鼠肺組織,3、7天炎性細(xì)胞浸潤為主,14天除炎性細(xì)胞浸潤外膠原開始沉積;21天膠原沉積增多;28天膠原大量堆積。HYP含量21和28天明顯增高。②BLM組小鼠血漿中IFN-γ含量3

3、～7天時明顯增高,14～28逐漸降低;TGF-β1含量3天時明顯增高,7～14天時降低,21～28天時明顯升高;Th指數(shù)3～14天時以Th1增高為主,21～28天時以Th2增高為主。③BLM組小鼠肺泡灌洗液中IFN-γ含量7天時升高,隨后逐漸降低;TGF-β1含量7～21天時均升高,28天時略呈下降趨勢;Th指數(shù)均以Th2增高為主。④BLM組小鼠7天時,脾和胸腺 Th指數(shù)分別以 Th2和Th1增高為主。⑤BLM組小鼠外周血中CD4+CD

4、25+Tregs,3天時高于NS組,7～14天時呈逐漸下降趨勢,21、28天又明顯上升;脾中CD4+CD25+Tregs,3～14天時逐漸上升,14天時最高,21、28天下降,但始終高于NS組。
　　小結(jié):①BLM誘導(dǎo)小鼠PF病程中,3～7天處于急性炎癥期,14～21天處于炎癥和纖維化交界期,21～28天處于纖維化期。②外周血在急性炎癥期Th1反應(yīng)占優(yōu)勢,炎癥和纖維化交界期由Th1向Th2反應(yīng)為主轉(zhuǎn)化,纖維化期以Th2反應(yīng)為主;肺

5、泡灌洗液在整個病程中Th2反應(yīng)占優(yōu)勢;脾和胸腺在炎癥期分別以 Th2和Th1反應(yīng)為主。③外周血中CD4+CD25+Tregs比例在整個病程中都高于NS組,急性炎癥期其升高幅度逐漸減小,纖維化期其升高幅度增大;脾中Tregs比例在急性炎癥期升高,纖維化期稍降低。④CD4+CD25+Tregs與BLM誘導(dǎo)小鼠PF病程具有相關(guān)性,有可能通過調(diào)節(jié)Th1/Th2反應(yīng)或直接作用于肺成纖維細(xì)胞來影響PF形成。
　　第二部分來源于肺纖維化小鼠的C

6、D4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對Th1/Th2極化的影響
　　目的:探討來源于肺纖維化小鼠的外周血淋巴細(xì)胞(Peripheral blood lymphocytes, PBL)和CD4+CD25+Tregs對正常脾淋巴細(xì)胞(splenic lymphocytes, SPL)Th1/Th2極化的影響。
　　方法:小鼠氣管內(nèi)灌注 BLM14天后,采集外周血,經(jīng)密度梯度離心法分離出PBL,作為刺激細(xì)胞;或用流式細(xì)胞分選儀直接從PBL

7、中分選出CD4+CD25+Tregs和非Treg淋巴細(xì)胞,作為刺激細(xì)胞;采用紅細(xì)胞裂解法制備正常SPL作為反應(yīng)細(xì)胞;將PBL或CD4+CD25+Tregs或非CD4+CD25+Treg淋巴細(xì)胞或SPL與SPL1:1共培養(yǎng),分別于0.5、2、4、8、12和24h收集共培養(yǎng)細(xì)胞上清液,ELISA法檢測上清液中TGF-β1、IFN-γ和IL-4的含量。
　　結(jié)果:①PBL體外培養(yǎng)0.5～24h產(chǎn)生TGF-β1,且0.5h時產(chǎn)生最高。②P

8、BL刺激SPL0.5h可使IFN-γ和IL-4增多,隨后2～12h IFN-γ含量逐漸下降,4～24h IL-4含量逐漸升高,Th指數(shù)以Th2增高為主。③非Tregs淋巴細(xì)胞對SPL作用不明顯;CD4+CD25+Tregs刺激SPL使IL-4依時增加,IFN-γ含量先增加后逐漸減低, Th指數(shù)以Th2增高為主;
　　小結(jié):①來源于PF的PBL在體外短時間培養(yǎng)有分泌功能。②來源于PF的PBL能使Th1/Th2平衡向Th2方向極化。③

9、CD4+CD25+Tregs能使Th1/Th2平衡向Th2方向極化;④來源于 PF的PBL對 Th1/Th2極化的影響有可能是通過CD4+CD25+Tregs來發(fā)揮作用的。
　　第三部分來源于肺纖維化小鼠的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對肺成纖維細(xì)胞增殖的影響
　　目的:探討來源于 PF小鼠的PBL和CD4+CD25+Tregs對正常肺成纖維(Lung Fibroblasts, LF)細(xì)胞增殖的影響。
　　方法:取生長

10、狀態(tài)良好的3～5代LF細(xì)胞用CFSE標(biāo)記,然后與來源于PF小鼠的PBL按1:10和1:1比例,或與CD4+CD25+Tregs按1:1比例混合培養(yǎng)48h,采用流式細(xì)胞儀檢測LF細(xì)胞熒光強(qiáng)度,反映LF細(xì)胞增殖指數(shù)。采用MTT法檢測 CD4+CD25+Tregs0.5和2h培養(yǎng)上清液對LF細(xì)胞增殖程度的影響。
　　結(jié)果:①來源于PF的PBL和CD4+CD25+Tregs分別與LF10:1或1:1混合培養(yǎng)均可使LF細(xì)胞增殖指數(shù)明顯增高。