過繼轉(zhuǎn)輸CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對(duì)博來霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化病程的影響及藥物干預(yù).pdf

1、文章從以下兩方面就過繼轉(zhuǎn)輸CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對(duì)博來霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化病程的影響及藥物干預(yù)進(jìn)行了綜述。
　　第一部分來源于PF小鼠的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對(duì)博來霉素誘導(dǎo)小鼠PF病程的影響
　　前期的研究結(jié)果表明,CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4+CD25+ regulatory T cells,Tregs)與博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化(PF)的病程存在重要的相關(guān)性,因此,進(jìn)一步研究了過繼轉(zhuǎn)輸來源于P

2、F小鼠外周血的淋巴細(xì)胞或Tregs對(duì)小鼠PF病程的影響。
　　目的:探討來源于PF小鼠的外周血淋巴細(xì)胞(peripheral blood lymphocytes, PBL)和Tregs對(duì)博來霉素誘導(dǎo)的小鼠PF病程的影響,進(jìn)一步證實(shí)Tregs在PF病程中的作用。
　　一、預(yù)防性過繼轉(zhuǎn)輸PF小鼠的外周血Tregs對(duì)博來霉素誘導(dǎo)小鼠PF病程的影響
　　方法:采用氣管內(nèi)灌注博來霉素(BLM),建立小鼠PF模型。造模14d后,采

3、用密度梯度離心和流式分選法,分別獲取 PF小鼠外周血中的淋巴細(xì)胞和Tregs。采用尾靜脈注射法,將獲得的淋巴細(xì)胞或Tregs過繼轉(zhuǎn)輸給正常小鼠,并于第2d將過繼轉(zhuǎn)輸后的小鼠氣管內(nèi)灌注生理鹽水或BLM,于造模后的7、14、21和28d分批處死小鼠。采用HE染色和肺HYP含量測(cè)定評(píng)價(jià)PF變化程度。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)過繼轉(zhuǎn)輸PBL后的小鼠(分為NS組和BLM組)外周血、胸腺中Tregs的比例(CD4+CD25+T細(xì)胞/CD4+T細(xì)胞)變化。<

4、br>　　結(jié)果:①過繼轉(zhuǎn)輸PBL對(duì)NS組肺病理學(xué)及HYP含量無明顯影響,僅見少量炎性細(xì)胞浸潤。②過繼轉(zhuǎn)輸PBL的BLM組肺7d可見炎性細(xì)胞浸潤,14d滲出較明顯,21d肺泡結(jié)構(gòu)開始受損、膠原沉積,28d膠原增加、肺泡結(jié)構(gòu)受損;肺HYP含量7d、28d較未過繼轉(zhuǎn)輸?shù)腂LM組明顯下降。③過繼轉(zhuǎn)輸Tregs對(duì)NS組肺病理學(xué)及HYP含量無明顯影響,僅見少量炎性細(xì)胞浸潤。④過繼轉(zhuǎn)輸Tregs的BLM組肺7d少量炎性細(xì)胞浸潤,14d炎性細(xì)胞浸潤明顯

5、,21d膠原沉積,28d時(shí)部分肺泡受損、膠原沉積增多。肺HYP含量7d、21d較未過繼轉(zhuǎn)輸?shù)腂LM組明顯下降。⑤外周血中Tregs的比例,14～28d BLM組均高于NS組。⑥胸腺中Tregs的比例,7～28d BLM組均高于NS組。
　　小結(jié):①BLM誘導(dǎo)小鼠PF模型,3至7天處于急性炎癥期,14至21天處于炎癥和纖維化交界期,以炎癥為主;28天基本處于炎癥晚期及纖維化期(前期結(jié)果已證明)。②預(yù)防性過繼轉(zhuǎn)輸PF小鼠的PBL或Tr

6、egs對(duì)NS組小鼠肺無明顯影響。③預(yù)防性過繼轉(zhuǎn)輸PF小鼠的PBL能夠穩(wěn)定BLM誘導(dǎo)的小鼠PF病程,主要減輕急性炎癥期的炎癥反應(yīng)以及纖維化期的膠原沉積。④預(yù)防性過繼轉(zhuǎn)輸PF小鼠外周血的Tregs能夠穩(wěn)定BLM誘導(dǎo)的小鼠PF病程,主要減輕急性炎癥期和交界期的炎癥反應(yīng)、膠原沉積。
　　二、急性過繼轉(zhuǎn)輸PF小鼠外周血Tregs對(duì)博來霉素誘導(dǎo)小鼠PF病程的影響
　　方法:采用氣管內(nèi)灌注BLM,建立小鼠PF模型。造模14d后,采用密度梯

7、度離心和流式分選法,分別獲取PF小鼠外周血中的淋巴細(xì)胞和Tregs。將獲得的PBL或Tregs過繼轉(zhuǎn)輸給另一批已造模3d的小鼠,于造模后的7、14、21和28d分批處死小鼠。采用HE染色和肺HYP含量測(cè)定評(píng)價(jià)PF變化程度。
　　結(jié)果:過繼轉(zhuǎn)輸PBL對(duì)NS組肺病理學(xué)及HYP含量無明顯影響,僅見少量炎性細(xì)胞浸潤。過繼轉(zhuǎn)輸PBL能夠加重BLM組肺病理學(xué)病變,肺HYP含量21d較未過繼轉(zhuǎn)輸PBL的BLM組明顯增高。過繼轉(zhuǎn)輸Tregs能夠加

8、重BLM組肺病理學(xué)病變,肺HYP含量28d較未過繼轉(zhuǎn)輸Tregs的BLM組明顯增高。
　　小結(jié):急性過繼轉(zhuǎn)輸PF小鼠的PBL能夠加重博來霉素誘導(dǎo)的小鼠PF病程,主要加重交界期的炎癥反應(yīng)。同樣,急性過繼轉(zhuǎn)輸PF小鼠的Tregs能夠加重博來霉素誘導(dǎo)的小鼠PF病程,但主要加重纖維化期膠原沉積。
　　第二部分異蓮心堿和潑尼松對(duì)博來霉素誘導(dǎo)小鼠PF病程中Tregs變化的影響
　　目的:研究異蓮心堿和潑尼松對(duì)BLM誘導(dǎo)小鼠PF病程

9、中Tregs變化的影響,結(jié)合療效評(píng)價(jià)Tregs與PF病程的相關(guān)性。
　　方法:將昆明小鼠分為6組,分別為對(duì)照組、模型組、對(duì)照+潑尼松組、模型+潑尼松組、對(duì)照+異蓮心堿組、模型+異蓮心堿組。采用氣管內(nèi)灌注 BLM制備PF模型,造模后第2d開始,各組小鼠分別灌胃給予生理鹽水/潑尼松/異蓮心堿,一日兩次。于3、7、14、21和28d分批處死小鼠。采用HE和Masson染色評(píng)價(jià)肺改變?cè)u(píng)價(jià)PF病變程度;采用ELISA法測(cè)定血漿中TGF-β1

10、、IFN-γ含量變化,評(píng)價(jià)PF病程中Th1/Th2反應(yīng);采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠外周血中Tregs比例變化。
　　結(jié)果:①對(duì)照+潑尼松組、對(duì)照+異蓮心堿組肺無明顯變化;與模型組比較,模型+潑尼松組3～14d炎癥明顯減弱,但21、28d膠原沉積并未明顯減少;與模型比較,模型+異蓮心堿組3～14d炎癥有所減弱,21d、28d膠原沉積明顯減少。②模型+潑尼松組血漿中,7～28d IFN-γ含量明顯高于模型組,3d、7d、14d、28d T

11、GF-β1含量明顯低于模型組。③模型+異蓮心堿組血漿中,21d、28d IFN-γ含量明顯高于模型組,3d、14d、21d、28d TGF-β1含量明顯低于模型組。④模型+潑尼松組外周血中Tregs的比例,3d、7d較模型組明顯降低,21d、28d較模型組明顯升高。⑤模型+異蓮心堿組小鼠外周血中Tregs比例,7d、21d、28d較模型組明顯降低。
　　小結(jié):潑尼松可能是通過糾正PF急性炎癥期的Th1/Th2失衡和降低Tregs,