基于高通量技術(shù)的蒙醫(yī)未熟熱、成熟熱證期蛋白質(zhì)組學(xué)標(biāo)志物與變證機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　1.采用高通量質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)篩選蒙醫(yī)未熟熱證期和成熟熱證期差異表達(dá)蛋白，分析其在疾病轉(zhuǎn)變過(guò)程中的功能機(jī)制、作用，初步為蒙醫(yī)發(fā)熱分期、分型提供“生物學(xué)依據(jù)”。
　　2.基于蛋白質(zhì)組學(xué)的蒙醫(yī)溫病未熟熱、成熟熱證期變證機(jī)制的探討和試述。
　　方法：
　　采集符合標(biāo)準(zhǔn)的腮腫病組、流行性感冒組和麻疹病組等三組疾病蒙醫(yī)未熟熱、成熟熱二證期靜脈血5ml，離心、去除血細(xì)胞、分離血漿；對(duì)血漿樣品進(jìn)行56℃高溫滅活處理；采

2、用AKTA蛋白純化儀去除20余種高豐度蛋白；使用BCA定量試劑盒及10-20％SDS-PAGE梯度凝膠電泳進(jìn)行定量和質(zhì)量檢測(cè)；再對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行蛋白TMT10標(biāo)記后，注入C18色譜柱，采用高通量質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)對(duì)其進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)，測(cè)定二證期蛋白含量，篩選二證期差異表達(dá)蛋白，尋找辯證診斷指標(biāo)和特異性標(biāo)志物。
　　結(jié)果：
　　質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果顯示，共檢測(cè)出1500種蛋白，檢測(cè)多肽次數(shù)為41632，檢測(cè)多肽種類數(shù)為7619，其中在二證期

3、有差異表達(dá)的共1323個(gè)，差異表達(dá)1.3倍以上共1077個(gè)，成熟熱和未熟熱證期與正常組比較共同上調(diào)和下調(diào)的共164個(gè)（其中上調(diào)95個(gè)，下調(diào)69個(gè)），其中三組疾病在二證期同時(shí)上調(diào)和下調(diào)且差異1.3倍以上的共有8個(gè)。分別為范可尼貧血組蛋白D2亞型X2（Fanconi anemia, complementation group D2）、核酸內(nèi)切酶結(jié)構(gòu)域蛋白1前體（endonuclease domain containing1）、細(xì)胞周期蛋白依

4、賴性激酶5激活因子2（cyclin-dependent kinase5 regulatory subunit2）、DnaJ-Hsp40同源物亞家族C成員4（DnaJ homolog,subfamily C member4）、泛素羧基末端水解酶24亞型X1（PREDICTED:ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase24 isoform X1）、布雷菲德菌素A抑制性鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子3亞型X1（PRED

5、ICTED:brefeldin A-inhibited guanine nucleotide-exchange protein3isoform X1）、NMDA2D離子型谷氨酸受體前體（glutamate receptor ionotropic,NMDA2D precursor）、配體依賴性輔助依賴因子亞型X1(PREDICTED:ligand-dependent corepressor isoformX1)等。其中上調(diào)6個(gè)，下調(diào)2個(gè)。