IL-36α在咪喹莫特誘導(dǎo)小鼠銀屑病皮損中的表達(dá)及IL-36抗體對(duì)CCL20的影響研究.pdf

1、目的：
　　1.構(gòu)建咪喹莫特乳膏誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型;
　　2.初步探討IL-36α在咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮損中的表達(dá)。
　　3.研究IL-36抗體對(duì)咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣炎癥是否具有緩解作用。
　　4.研究IL-36抗體對(duì)咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮損中CCL20的影響，從而探討IL-36參與銀屑病的可能作用機(jī)理。
　　方法：
　　1.建立咪喹莫特乳膏誘導(dǎo)的小鼠銀屑病模型，對(duì)照組涂抹凡士林

2、乳膏;
　　2.通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western blot檢測(cè)IL-36α在小鼠皮損中的表達(dá)。
　　3.將BALB/c小鼠隨機(jī)分為3組:空白對(duì)照組:凡士林乳膏+腹腔注射PBS緩沖液;模型組:咪喹莫特乳膏+腹腔注射PBS緩沖液;實(shí)驗(yàn)組:咪喹莫特乳膏+腹腔注射IL-36抗體。
　　4.每天觀察小鼠銀屑病樣炎癥反應(yīng)的變化，同時(shí)進(jìn)行PASI評(píng)分;通過HE染色觀察組織病理皮損改變，并測(cè)量表皮層的垂直厚度。
　　5.通

3、過免疫組織化學(xué)法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)小鼠皮損中CCL20的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.IL-36α在小鼠銀屑病皮損及正常小鼠皮膚中的表達(dá)
　　實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，模型組IL-36α的mRNA的表達(dá)顯著高于對(duì)照組(t=7.523，P＜0.05)。免疫印跡結(jié)果顯示，模型組小鼠皮損中IL-36α的蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=31.695，P＜0.05）。以上結(jié)果提示IL-36α可能參與了銀屑病的發(fā)

4、病機(jī)制。
　　2.IL-36抗體對(duì)咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮損的影響
　　研究發(fā)現(xiàn)空白對(duì)照組小鼠背部皮膚未見明顯異常;涂抹咪喹莫特第3天模型組部分出現(xiàn)淡紅斑，隨后皮膚漸漸出現(xiàn)增厚，到涂抹咪喹莫特乳膏第4-6天，模型組紅斑顏色加深、鱗屑變厚密，第7-8天呈典型銀屑病樣改變，部分小鼠開始出現(xiàn)脫屑，可見點(diǎn)狀出血、薄膜現(xiàn)象;相比模型組，IL-36抗體實(shí)驗(yàn)組在涂抹咪喹莫特第3天時(shí)小部分小鼠背部皮膚出現(xiàn)淡紅斑伴少量鱗屑，至第5-8天鱗

5、屑、紅斑及皮膚厚度才慢慢加重，但各指標(biāo)均不如模型組，且第8天實(shí)驗(yàn)組小鼠未出現(xiàn)典型的銀屑病樣炎癥皮損，但鱗屑、紅斑及增厚的指標(biāo)仍比空白對(duì)照組明顯升高。從臨床表現(xiàn)來看，這表明IL-36抗體可以改善咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣炎癥反應(yīng)。
　　第8天取小鼠背部皮膚進(jìn)行HE染色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)照組小鼠皮膚未見明顯異常;模型組大部分小鼠皮損呈現(xiàn)典型的銀屑病樣改變，可見角質(zhì)層增厚、表皮突延長(zhǎng)增寬;而實(shí)驗(yàn)組小鼠表皮層較平整，角化不全的細(xì)胞數(shù)減少，且厚度

6、較模型組低。從病理結(jié)果看，也表明IL-36抗體可以改善咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣炎癥反應(yīng)。
　　3.IL-36抗體對(duì)咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮損CCL20的影響
　　免疫組化結(jié)果示空白對(duì)照組小鼠CCL20僅僅少量表達(dá)或無表達(dá)，顏色呈淡褐色;模型組小鼠CCL20表達(dá)主要定位于表皮層，顏色呈深褐色、棕褐色，著色細(xì)胞層數(shù)及數(shù)量較對(duì)照組顯著增多;IL-36抗體實(shí)驗(yàn)組小鼠CCL20也主要定位于表皮層，著色細(xì)胞層數(shù)及數(shù)量明顯比模型組低

7、，CCL20染色呈淺褐色。
　　免疫組化結(jié)果示，實(shí)驗(yàn)組與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=3.25，P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=1.45，P＞0.5）。通過非參數(shù)檢驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)模型組和實(shí)驗(yàn)組小鼠CCL20主要表達(dá)于表皮層，且實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組與模型組在CCL20表達(dá)方面均具有顯著性差異(P＜0.05)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR也顯示實(shí)驗(yàn)組（1.63±0.19）與模型組（2.65±0.47）皮損CCL20的