三椏苦化學(xué)成分研究.pdf

1、目的:
　　蕓香科植物(Rutaceae)約有155屬，主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)，其中三椏苦屬于蕓香科中的蜜茱萸屬。三椏苦[Melicope ptelefolia(Champ.ex Benth.)Hartley]始載于《嶺南采藥錄》，又名:三丫苦，三叉虎、三枝槍、三叉苦、三丫虎等，在我國生長于江浙、兩廣、海南等沿海省份。本品主要用于治療跌打損傷、外傷、膿瘡、濕疹等病癥。目前三椏苦已經(jīng)廣泛運用于括金梅感冒片、雙龍風(fēng)濕跌打膏、乳癖安

2、消膠囊、三九胃泰、三九感冒靈等多種中成藥中。
　　現(xiàn)代科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)三椏苦具有抗炎，鎮(zhèn)痛，抗氧化，保肝，抗菌等作用。文獻也報道從三椏苦中分離出生物堿、苯駢吡喃類、黃酮等多種化學(xué)成分。但是目前三椏苦的主要有效成分并不明確，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚未制定，為進一步開發(fā)其藥用價值，闡明其有效成分，對三椏苦石油醚、氯仿和乙酸乙酯部位中化學(xué)成分進行系統(tǒng)研究，并建立主要化學(xué)成分的含量測定方法。
　　方法:
　　新鮮的三椏苦莖枝30kg，粉碎后，9

3、5％乙醇室溫浸提6次，每次用量90升。濃縮提取液得浸膏(675g)。將浸膏懸浮于1L水中，依次以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，濃縮后分別得石油醚(45g)、氯仿(300g)、乙酸乙酯(75 g)、正丁醇(110g)部分。利用硅膠、Sephadex LH-20、反向ODS硅膠等分離技術(shù)對石油醚、氯仿和乙酸乙酯部位進行分離純化，得到單體化合物。綜合運用質(zhì)譜(MS)及核磁共振光譜(1H-NMR，13C-NMR，DEPT，1H-1H-CO

4、SY，HSQC，HMBC)等現(xiàn)代光譜和波譜學(xué)技術(shù)鑒定所得單體化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
　　利用MTT法對新化合物（化合物15）進行了細胞毒性試驗。
　　采用高效液相法，對新化合物（化合物15）進行含量測定，色譜條件如下，色譜柱:Kromasil C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）;流動相:甲醇∶水(42∶68);流速:1.0mL·min-1;進樣量:20μl;檢測波長:210nm;柱溫:25℃;
　　結(jié)果:

5、>　　從三椏苦莖枝95％乙醇提取物的石油醚、氯仿和乙酸乙酯部位中分離得到22個成分，鑒定了22個化合物，包括5個甾體、10個香豆素、2個蔥醌、1個黃酮、2個脂肪烴，2個生物堿類化合物，分別為豆甾-3，5-二烯-7-酮(1)、大黃素甲醚(2)、β-谷甾酮(3)、棕櫚酸(4)、谷甾醇(5)、(24R)-乙基-3β，5α，6β-三羥基膽甾烷(6)、dihydroxanthyletin(7)、正二十烷酸甲酯(8)、大黃素(9)、3-異戊烯基傘形

6、花內(nèi)酯(10)、傘形花內(nèi)酯(11)、紫花前胡內(nèi)酯(12)、rudicoumarin C(13)、N-p-香豆酰胺(14)、3-(2'，3'-二羥基)異戊基-7-羥基香豆素(15)、三椏苦甲素(16)、4-羥基-2-(1H)-喹啉酮(17)、帕奇潑酚(18)、3'-hydroxyxanthyletin(19)、補骨脂素(20)、豆甾醇(21)、異紫花前胡內(nèi)酯(22)。將分離得到的化合物依次編號為1-22，其中化合物15為新化合物，命名為三

7、椏苦素D，另有12個化合物(1、2、3、6、7、8、9、12、13、15、17、19)為首次從三椏苦中分離得到。
　　細胞毒性試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，化合物15對人乳腺癌細胞(MCF-7)，人結(jié)腸癌細胞株(SW-480)，人宮頸癌細胞(HeLa)未表現(xiàn)出較強的細胞毒活性。
　　采用HPLC法對三椏苦中新化合物三椏苦素D的含量進行了分析，結(jié)果表明，三椏苦素D在0.24-2.64μg·ml-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率為