Toll樣受體信號(hào)通路關(guān)鍵基因與缺血性中風(fēng)及其中醫(yī)證候易感性的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、目的:
　　本研究旨在通過基因富集技術(shù)篩選出影響缺血性中風(fēng)病的重要通路-Toll樣受體信號(hào)通路(Toll-like receptor signaling pathway)并對(duì)其2個(gè)關(guān)鍵基因:腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(Tumor necrosis factor receptor-associated factor6，TRAF6)基因及Toll樣受體4(Toll-like receptors4，TLR4)單核苷酸多態(tài)性(Single

2、Nucleotide Polymorphisms，SNP)與缺血性中風(fēng)(Ischemic Stroke，IS)及其中醫(yī)證候的相關(guān)性進(jìn)行分析，此外，我們還對(duì)其關(guān)鍵基因多態(tài)性與血清血脂水平的相關(guān)性進(jìn)行了分析，我們希望本研究可以為進(jìn)一步研究缺血性中風(fēng)的遺傳機(jī)制奠定一定的基礎(chǔ)，以及為揭示缺血性中風(fēng)病中醫(yī)辨證分型的科學(xué)內(nèi)涵提供一定的遺傳學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　本研究運(yùn)用遺傳流行病學(xué)的方法采用基因組富集(Gene set enrich

3、ment analysis，GSEA)等生物信息學(xué)方法篩選出符合納入排除標(biāo)準(zhǔn)的基因芯片表達(dá)譜數(shù)據(jù)，并初步篩選出在轉(zhuǎn)錄水平上影響缺血性中風(fēng)的通路及基因;繼而采用病例對(duì)照研究設(shè)計(jì)，共納入缺血性中風(fēng)病患者184例，對(duì)照組116例。運(yùn)用Sanger基因分型技術(shù)對(duì)研究對(duì)象的外周靜脈血的TRAF6基因rs5030411、 rs5030416功能SNPs、以及TLR4基因的rs10759932、rs11536889和rs1927914多態(tài)性進(jìn)行基因分

4、型檢測(cè)。使用SPSS17.0 forwindows、STATA(STATA College Station，Texas，USA)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　1.經(jīng)過篩查后，本研究在GEO數(shù)據(jù)庫中篩選到了1套芯片數(shù)據(jù)，即GSE16561，對(duì)此套數(shù)據(jù)直接進(jìn)行基因組富集分析，得到了影響缺血性中風(fēng)的關(guān)鍵通路Toll樣受體信號(hào)通路及該通路上的關(guān)鍵差異基因(TLR4、TRAF6)。
　　2.哈溫平衡(Hardy-Weinb

5、erg Equi l ibrium，HWE)檢驗(yàn):所研究的5個(gè)基因位點(diǎn)在對(duì)照組中的基因型分布均符合HWE平衡定律(P＞0.050)。
　　3.TRAF6基因單位點(diǎn)多態(tài)性與缺血性中風(fēng)易感性的分析結(jié)果
　　(1) TRAF6基因的rs5030411和rs5030416多態(tài)性與缺血性中風(fēng)易感性的不存在關(guān)聯(lián)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＞0.050)。
　　(2) TRAF6基因的rs5030411和rs5030416多態(tài)性與男性

6、、女性缺血性中風(fēng)易感性的不存在關(guān)聯(lián)，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＞0.050)。
　　4.TLR4基因單位點(diǎn)多態(tài)性與缺血性中風(fēng)易感性的分析結(jié)果
　　(1)對(duì)rs10759932的研究，我們發(fā)現(xiàn)其3種遺傳模型與缺血性中風(fēng)易感性相關(guān):其中，在雜合子遺傳模型(Model2:OR=0.095，95％CI:0.022-0.414，P=0.002)和純合子模型(Model2:OR=0.130，95％CI:0.029-0.581，P=0.0

7、08)其多態(tài)性與性缺血性中風(fēng)的易感性相關(guān);在隱性遺傳模型中，rs10759932多態(tài)性與性缺血性中風(fēng)的易感性相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Model2:OR=9.120，95％CI:2.224-37.396，P=0.002)。
　　(2)對(duì)rs1927914分析，結(jié)果提示:純合子遺傳模型，我們發(fā)現(xiàn)rs1927914多態(tài)性與缺血性中風(fēng)易感性相關(guān)(Model2:OR=0.226，95％CI:0.067-0.764，P=-0.017);而隱性

8、遺傳模型，我們發(fā)現(xiàn)rs1927914與缺血性中風(fēng)易感性相關(guān)(Model1:OR=2.246，95％CI:1.214-4.158,P=0.010，Model2:OR=3.522,95％CI:1.128-10.996，P=0.030)。
　　(3) TLR4基因rs11536889多態(tài)性與缺血性中風(fēng)易感性的不存在關(guān)聯(lián)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＞0.050)。
　　(4)在女性分層的研究中，結(jié)果示:TLR4基因rs10759932

9、多態(tài)性與女性缺血性中風(fēng)的易感性相關(guān)。雜合子模型:(Model2:OR=0.024，95％CI:0.002-0.364，P=0.007);純合子遺傳模型結(jié)果為(Model2:OR=0.014，95％CI:0.001-0.234，P=0.003);此外，隱性遺傳模型中，在經(jīng)過多因素調(diào)整的的Model2中，結(jié)果示rs10759932多態(tài)性與女性缺血性中風(fēng)的易感性相關(guān)（OR=52.29，95％CI:3.753-728.48，P=0.003）。<

10、br>　　(5)在女性分層的研究中，結(jié)果示:TLR4基因rs1927914多態(tài)性與女性缺血性中風(fēng)的易感性相關(guān):雜合子遺傳模型(Model2:OR=0.070，95％CI:0.006-0.865，P=0.038);純合子遺傳模型(Model2:OR=0.065，95％CI:0.007-0.630，P=0.018);此外，在隱性遺傳模型的中，我們發(fā)現(xiàn)其多態(tài)性與缺血性中風(fēng)易感性相關(guān):(OR=15.078,95％CI:1.621-140.25,

11、P=0.017)。
　　(6)在男性的分層分析中，結(jié)果示:在經(jīng)過多因素校正的顯性遺傳模型的Model2，TLR4基因rs1927914多態(tài)性與男性缺血性中風(fēng)的易感性相關(guān)(OR:0.147，95％CI:0.023-0.952，P=0.044)。
　　5.Toll樣信號(hào)通路關(guān)鍵基因位點(diǎn)多態(tài)性與缺血性中風(fēng)不同中醫(yī)證候的分析結(jié)果
　　(1)風(fēng)證:在對(duì)缺血性中風(fēng)風(fēng)證及非風(fēng)證的研究中，我們的研究結(jié)果表明:TRAF6基因rs5030

12、411、rs5030416多態(tài)性，以及TLR4基因rs10759932、rs11536889和rs1927914多態(tài)性與缺血性中風(fēng)痰證易感性不存在關(guān)聯(lián)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.050)。
　　(2)痰證:在對(duì)痰證及非痰證缺血性中風(fēng)患者的分析中，研究結(jié)果表明TRAF6、TLR4基因所候選的5個(gè)基因位點(diǎn)多態(tài)性均與缺血性中風(fēng)痰證易感性不存在關(guān)聯(lián)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.050)。
　　(3)血瘀證:在對(duì)血瘀證及非血瘀證缺血性中

13、風(fēng)患者的分析中，研究結(jié)果表明TRAF6基因rs5030411、rs5030416多態(tài)性，以及TLR4基因rs10759932、rs11536889多態(tài)性與缺血性中風(fēng)痰證易感性的不存在關(guān)聯(lián)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.050)。而在對(duì)TLR4基因rs1927914多態(tài)性的研究中，我們發(fā)現(xiàn)其顯性模型在校正性別、年齡的Model1中，其與缺血性中風(fēng)痰證易感性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=2.182，95％CI:1.026-4.639，P=0.043)，但

14、是在多因素校正的Model2，這一統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)則未被重復(fù)。
　　(4)氣虛證:在對(duì)氣虛與非氣虛證缺血性中風(fēng)患者的研究中，我們的研究結(jié)果表明:TR AF6、TLR4基因多態(tài)性與缺血性中風(fēng)氣虛證易感性的不存在關(guān)聯(lián)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.050)。
　　6.TRAF6、TLR4基因位點(diǎn)多態(tài)性與缺血性中風(fēng)患者血脂水平的分析結(jié)果
　　研究發(fā)現(xiàn)TLR4基因rs11536889多態(tài)性均與缺血性中風(fēng)患者血清LDL水平存在關(guān)聯(lián)，差異有

15、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Padj2=0.046)。
　　結(jié)論:
　　(1)Toll樣受體信號(hào)通路可能是影響缺血性中風(fēng)的關(guān)鍵通路。
　　(2) TLR4基因rs10759932多態(tài)性可能與漢族人群缺血性中風(fēng)有關(guān)，其A1A2和A2A2基因型可能是漢族人群缺血性中風(fēng)的保護(hù)因素，可能會(huì)降低漢族人群、特別是漢族女性人群缺血性中風(fēng)易感性的風(fēng)險(xiǎn)。
　　(3) TLR4基因rs1927914多態(tài)性可能與漢族人群缺血性中風(fēng)有關(guān)，其A1A2和A

16、2A2基因型可能是漢族人群缺血性中風(fēng)的保護(hù)因素，可能會(huì)降低漢族人群、特別是漢族女性人群缺血性中風(fēng)易感性的風(fēng)險(xiǎn);此結(jié)果在漢族男性人群同樣可以得到驗(yàn)證。
　　(4) TRAF6、TLR4基因rs5030411和rs5030416多態(tài)性可能與缺血性中風(fēng)風(fēng)證、痰證、氣虛證、血瘀證易感性風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)。
　　(5) TLR4基因rs10759932、rs11536889以及rs1927914多態(tài)性可能與缺血性中風(fēng)風(fēng)證、痰證、氣虛證、血瘀證易