11-羰基-β-乙酰乳香酸抑制高血壓血管重構(gòu)作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：血管重構(gòu)是高血壓以及其他多種心血管疾病常見并發(fā)癥和病理基礎(chǔ)，越來越多地被作為心血管疾病的主要風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)，有效預(yù)防和抑制血管重構(gòu)對(duì)于控制高血壓等多種心血管疾病發(fā)生發(fā)展有著不可忽視的積極作用，可延緩疾病進(jìn)程，是預(yù)防甚至治療高血壓等心血管疾病的潛在手段和研究方向。當(dāng)前，應(yīng)用于臨床的抗高血壓藥種類繁多，但針對(duì)性治療血管重構(gòu)藥物卻相對(duì)欠缺，不能有效去除致病因或徹底抑制發(fā)病機(jī)制，逆轉(zhuǎn)或抑制疾病進(jìn)程，因此，研究和發(fā)現(xiàn)新的安全有效的旨在控制高血壓血

2、管重構(gòu)的針對(duì)性治療藥物就顯得尤為重要和迫切了。
　　傳統(tǒng)中藥在心血管疾病治療中發(fā)揮著不可替代的重要作用，文獻(xiàn)報(bào)道，中藥乳香（Boswellia Species）可在心血管疾病中發(fā)揮保護(hù)作用，抑制血管纖維化和重構(gòu)，保護(hù)血管。11-羰基-β乙酰乳香酸（AKBA）是從乳香樹脂中提取得五環(huán)三萜類化合物，是乳香提取物中的抗炎抗氧化活性最強(qiáng)的成分之一，安全無毒副作用。已有研究表明，乳香酸基于其良好的抗炎抗氧化作用，可作用于纖維化因子TGF-β

3、和MMPs活化表達(dá)，從而在組織重構(gòu)和纖維化進(jìn)程中發(fā)揮良好的保護(hù)作用。例如，乳香酸可以有效地減少TGF-β1表達(dá)，從而緩解TGF-β1誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈纖維化過程；抑制TGF-β1/Smad3信號(hào)通路，而減少結(jié)腸纖維化；另外，AKBA在動(dòng)脈粥樣硬化血管病變過程中表現(xiàn)出了良好抗炎作用，可有效抑制NF-κB介導(dǎo)的炎性反應(yīng)，減少M(fèi)MPs活化分泌，從而減少血管內(nèi)膜損傷，起到血管保護(hù)作用。
　　轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1（TGF-β1）和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP

4、s）在血管重構(gòu)過程中起到重要作用。TGF-β1過度活化會(huì)導(dǎo)致血管外膜成纖維細(xì)胞活化，從而導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)分泌增加、膠原沉積，同時(shí)還會(huì)引起MMPs活化，彼此反饋調(diào)節(jié)，引起血管細(xì)胞分化遷移以及血管組織破壞和重建。與此同時(shí)大量證據(jù)表明，內(nèi)源性的活性氧（ROS）和炎性因子是引起TGF-β1和MMPs過度表達(dá)的關(guān)鍵因子，通過抑制體內(nèi)過多的ROS和炎性反應(yīng)則可以較好的抑制或逆轉(zhuǎn)血管重構(gòu)，從而起到血管保護(hù)作用。
　　因此，我們認(rèn)為AKBA同樣能在

5、自發(fā)性高血壓大鼠胸主動(dòng)脈的血管重構(gòu)中，發(fā)揮良好的抗炎抗氧化作用，抑制內(nèi)源性ROS和炎癥，進(jìn)而有效調(diào)節(jié)纖維化因子TGF-β1和MMPs的表達(dá)活化，從而發(fā)揮良好抗纖維化以及抑制血管重構(gòu)作用，保護(hù)血管。
　　目的：
　　1.探討AKBA對(duì)高血壓血管重構(gòu)的保護(hù)作用。
　　2.闡明AKBA在血管重構(gòu)過程中的作用機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分為自發(fā)性高血壓大鼠體內(nèi)藥效學(xué)驗(yàn)證和成纖維細(xì)胞體外機(jī)制探討。
　　a)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)采用自發(fā)

6、性高血壓6周齡雄性大鼠，口服灌胃分別給予AKBA（20,40mg/kg），為期8周，初步評(píng)價(jià)AKBA藥理作用。
　　1.尾套管法監(jiān)測(cè)大鼠血壓。
　　2.血流變學(xué)全血粘度檢測(cè)。
　　3.生化檢測(cè)AKBA對(duì)血管收縮性物質(zhì)和體內(nèi)炎癥氧化狀態(tài)的影響。
　　4.H&E染色觀察和分析大鼠胸主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)改變情況。
　　5.馬森染色評(píng)估血管壁膠原沉積情況。
　　6.免疫熒光和免疫組化分別檢測(cè)TGF-β1/Smad3和

7、MMP2表達(dá)水平。b)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)采用AKBA（1,2,4μM）預(yù)處理血管外膜成纖維細(xì)胞1h，然后給予Ang II（0.1μM）24h。
　　1.ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中炎性因子和TGFβ-1分泌水平。
　　2.流式檢測(cè)Ang II刺激下ROS含量。
　　3.MTT檢測(cè)Ang II刺激下細(xì)胞活性。
　　4.Transwell檢測(cè)Ang II誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移水平。
　　5.免疫印跡法檢測(cè)AKBA干預(yù)過程中

8、對(duì)TGF-β1和MMPs通路的影響，分別檢測(cè)TGF-β1/Smad3，P-Smad3，Smad7和MMP2/9等蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，AKBA在體內(nèi)外可發(fā)揮良好的抗炎抗氧化作用，進(jìn)而有效抑制纖維化因子TGF-β1和MMP2/9活化表達(dá)，顯著改善血管重構(gòu)情況。
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，在自發(fā)性高血壓早期，SHR就已經(jīng)遭受到輕微的血管收縮，炎癥反應(yīng)，較為嚴(yán)重的氧化應(yīng)激反應(yīng)和明顯的血管重構(gòu)。相比WKY組，SHR胸主

9、動(dòng)脈壁橫切面積，血管壁中層厚度以及厚度/官腔比值都明顯增高（P＜0.05）。AKBA不能有效逆轉(zhuǎn)血壓和全血粘度增高狀態(tài)，但卻能有效降低體內(nèi)炎癥和氧化應(yīng)激水平，恢復(fù)血管收縮舒張物質(zhì)平衡。更重要的是，AKBA可有效抑制血管重構(gòu)，恢復(fù)血管正常形態(tài)，減少膠原在血管壁的沉積，其次AKBA還明確地減少了纖維化因子TGF-β1/Smad3和MMP2在血管壁的表達(dá)。
　　2.體外成纖維細(xì)胞中，AKBA顯著改善Ang II誘導(dǎo)的炎癥氧化應(yīng)激反應(yīng)，減

10、少炎性因子的表達(dá)，降低細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生，同時(shí)，減少因Ang II刺激引起的細(xì)胞過度活化和遷移。免疫印跡結(jié)果顯示AKBA能有效地調(diào)節(jié)纖維化進(jìn)程，降低細(xì)胞提取物中TGF-β1/Smad3, P-Smad3, Smad7和MMP2/9的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)論：
　　1.AKBA基于其良好的抗炎抗氧化作用，在高血壓血管重構(gòu)過程中發(fā)揮良好的血管保護(hù)作用，減少血管重構(gòu)。
　　2.AKBA可有效抑制促纖維化因子TGF-β1和MM