免疫蛋白酶體β5i在原發(fā)性高血壓血管重構(gòu)中的作用及機制的研究.pdf

1、目的:
　　探討免疫蛋白酶體β5i在血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)誘導(dǎo)的高血壓血管重構(gòu)過程中的作用及機制。
　　方法:
　　1.收集原發(fā)性高血壓患者血樣及正常對照患者血樣各20例。20S蛋白酶體檢測StressXpress(R)試劑盒測定兩組血樣中20S蛋白酶體(β5i)活性的水平。
　　2.6-8周齡的C57BL/6雄性小鼠，血管緊張素Ⅱ(AngⅡ，1000ng/kg/min)灌注7天后應(yīng)用

2、實時定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)及蛋白質(zhì)印跡(WesternBlot)，檢測AngⅡ灌注組及對照組小鼠血管組織中免疫蛋白酶體三個亞基β1i，β2i，β5i的mRNA、蛋白水平及β1i，2i，5i的活性。用免疫熒光共定位法檢測血管平滑肌細胞中是否表達β5i及AngⅡ灌注組和對照組小鼠血管組織中β5i的表達情況。
　　3.6-8周齡的C57BL/6雄性小鼠，隨機分為4組:對照組，AngⅡ

3、組，AngⅡ+β5i抑制劑（PR-957，12mg/kg/d）組及單獨抑制劑組。AngⅡ（AngⅡ，1000ng/kg/min），灌注14天。應(yīng)用鼠尾套管進行無創(chuàng)血壓監(jiān)測;應(yīng)用H&E染色、Elastin染色、 Masson染色和DHE染色，檢測各組小鼠血管組織的炎癥、彈力纖維、纖維化及氧化應(yīng)激水平;血管環(huán)檢測血管舒張功能;qPCR檢測β5i的功能。
　　結(jié)果:
　　1.原發(fā)性高血壓患者血樣中免疫蛋白酶體β5i的活性高于血壓正

4、常組。
　　2.免疫熒光染色示血管平滑肌細胞中表達免疫蛋白酶體β5i。
　　3.AngⅡ組β1i，β2i，β5i的蛋白水平及活性均高于對照組。AngⅡ組β2i的mRNA水平低于對照組，而β1i，β5i高于對照組。
　　4.C57BL/6小鼠基礎(chǔ)血壓在90-100 mmHg。AngⅡ+抑制劑組AngⅡ灌注后至灌泵結(jié)束血壓均在120mmHg，AngⅡ組維持在150mmHg，提示免疫蛋白酶體β5i抑制劑PR-957可以降低A

5、ngⅡ誘導(dǎo)的高血壓。
　　5.H&E病理學(xué)染色顯示，AngⅡ+β5i抑制劑組血管壁厚度及血管腔徑低于AngⅡ組，提示β5i抑制劑PR-957可以減輕AngⅡ誘導(dǎo)的高血壓引起的血管壁增厚及管腔增大。qPCR示β5i抑制劑可以抑制AngⅡ誘導(dǎo)的IL-6，TNF-α，MCP-1等炎癥因子的表達上調(diào)。
　　6.Elastin病理學(xué)染色顯示，與對照組相比，AngⅡ灌注組可致彈力纖維變性、斷裂、彈性降低，而β5i抑制劑可明顯抑制AngⅡ

6、的上述效應(yīng)。Masson染色顯示AngⅡ組，平滑肌細胞肥大增生明顯，血管周圍膠原沉積多于其他各組。提示免疫蛋白酶體β5i抑制劑PR-957可以改善AngⅡ誘導(dǎo)高血壓引起的血管彈力纖維變性、斷裂，減輕血管纖維化。
　　7.DHE染色顯示AngⅡ組與對照組相比，ROS水平顯著升高。AngⅡ+抑制劑組的ROS水平明顯低于模型組，單純抑制劑組與對照組無差異。提示β5i抑制劑PR-957可以減輕AngⅡ誘導(dǎo)高血壓引起的氧化應(yīng)激。
　　

7、8.利用血管灌流裝置對血管舒張功能進行檢測，在內(nèi)皮依賴性舒張藥乙酰膽堿(Ach)作用下，對照組及單獨抑制劑組舒張可達75％，而模型組舒張約為50％，AngⅡ+加抑制劑組舒張可達65％;在于非內(nèi)皮依賴性舒張藥硝普鈉(SNP)作用下，模型組舒張未達90％，而其他組可達90％以上。提示β5i抑制劑PR-957可以改善AngⅡ誘導(dǎo)高血壓引起的血管舒張功能下降。
　　結(jié)論:
　　1.原發(fā)性高血壓患者血樣中免疫蛋白酶體β5i的活性增高。