酒精對肝臟蛋白酶體LMP7活性亞基及蛋白酶體成熟蛋白的影響的研究.pdf

1、目的:通過建立大鼠酒精性肝病模型，觀察酒精性肝病發(fā)病過程中病理及超微結(jié)構(gòu)變化，分析酒精性肝病羰基應(yīng)激狀態(tài)下蛋白酶體活性亞基LMP7亞基及蛋白酶體成熟蛋白POMP的表達量，研究酒精對其影響，并分析二者在酒精性肝病發(fā)病機制中的作用。 方法:健康雄性成年Wistar大鼠40只，體重180～200g，正常喂養(yǎng)1周后隨機分為5組：正常對照組、模型1組、2組、3組、4組(各8只)。模型組給予酒精灌胃：1～4周給予40﹪酒精5g/kg·d，5

2、～8周給予50﹪酒精7g/kg·d，9～12周給予60﹪酒精10g/kg·d，每日分2次給予；其食物構(gòu)成為：酒精占總熱卡的46﹪，蛋白質(zhì)占18﹪，脂肪占14﹪(其中9﹪是不飽和脂肪酸)，碳水化合物占12﹪，同時給予維生素復(fù)合物和必需礦物質(zhì)。正常對照組予等量生理鹽水，飲食中碳水化合物所占比例升至58﹪以代替酒精。大鼠分別于造模6周(模型1組)、8周(模型2組)、10周(模型3組)、12周(正常對照組、模型4組)處死。HE及電鏡觀察肝組織病

3、理學(xué)改變，Bradford法測定蛋白含量，2，4-二硝基苯肼比色法測定大鼠肝組織蛋白質(zhì)羰基含量，熒光定量PCR及Western印跡法檢測蛋白酶體糜蛋白酶樣活性亞基LMP7及蛋白酶體成熟蛋白POMP表達量。 結(jié)果:病理切片結(jié)果顯示模型組大鼠6周時開始出現(xiàn)輕微脂肪變，隨攝酒時間延長，病變逐漸加重，至12周時脂肪變明顯，可見不同程度的肝細胞水腫、炎細胞浸潤及Mallory小體；超微結(jié)構(gòu)可見巨大及U型線粒體，線粒體膜斷裂，嵴消失或斷裂，

4、糖原代謝異常，可見較多代謝產(chǎn)物髓樣小體，染色質(zhì)分布異常。模型組大鼠血清生化指標(biāo)ALT、A S T、ALP等與正常對照組相比均明顯升高。隨攝酒時間延長，各模型組羰基含量與對照組相比均明顯增高，并呈逐漸升高趨勢。RT-PCR 及 Western-blotting 印跡法顯示LMP7亞基基因及蛋白表達量隨攝入酒精時間延長表達量逐漸減少，并與羰基含量呈負相關(guān)。蛋白酶體成熟蛋白POMP基因及蛋白水平隨攝酒增多呈逐漸升高趨勢。 結(jié)論: