中國常用農藥對蛋白酶體和線粒體的影響.pdf

1、帕金森病(Parkinson’s Disease，PD)是目前常見的老年性神經退行性疾病，在中國65歲以上人群中發(fā)病率超過1％[1]。流行病學研究表明農藥接觸，飲用井水，農業(yè)耕作等均有可能增加PD發(fā)病的風險[2]。而農藥很可能通過引起蛋白酶體功能紊亂，線粒體損傷以及與遺傳因素相互作用等幾個方面促進了PD的病理進程。中國是世界第一農藥生產和使用大國，了解我國農藥的作用機制對闡明帕金森的發(fā)病機理以及更好的預防和治療帕金森病具有十分重要的意義

2、。
　　 第一章檢測中國常用農藥對蛋白酶體和線粒體的影響
　　 目的：檢測中國常用農藥對蛋白酶體活性和線粒體形態(tài)學的影響。
　　 方法：構建穩(wěn)定表達pEGFP-CL1(GFP-CL1)的人類神經母細胞瘤(SH-SY5Y)細胞系，并以此為模型檢測蛋白酶體活性。與GFP融合表達的CL1是一個含有16個氨基酸(ACKNWFSSLSHFVIHL)的肽段，由蛋白酶體降解[3]。Western Blot檢測GFP-CL1表達

3、量的變化即反映農藥對蛋白酶體的影響。通過對線粒體標志蛋白(TOM20)進行免疫熒光染色，觀察各種農藥對HeLa細胞線粒體形態(tài)的影響。
　　 結果：農藥包括百草枯、魚藤酮、毒死蜱、硫丹、氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、二甲戊二靈、吡螨胺和唑螨酯，可以引起GFP-CL1表達量增加，蛋白酶體活性降低。農藥可以導致線粒體不同程度和不同形式的改變。
　　 結論：農藥導致蛋白酶體活性降低和線粒體形態(tài)改變可能是PD發(fā)病的潛在機制。
　　

4、 第二章 PD相關基因SH-SY5Y細胞模型的構建
　　 目的：建立穩(wěn)定表達各種PD相關基因和病理性突變體的SH-SY5Y細胞模型。
　　 方法：通過G418篩選，建立了穩(wěn)定表達各種PD相關基因和病理性突變體的SH-SY5Y細胞模型，包括Parkin野生型及其 T240R突變體；PINK1野生型及其G309D突變體；LRRK2野生型和DJ-1野生型穩(wěn)定表達細胞系及自噬水平相關蛋白LC3穩(wěn)定表達細胞系。
　　 結果