補(bǔ)腎化痰法對Alzheimer病模型大鼠泛素-蛋白酶體通路的影響.pdf

1、目的： 從腎虛痰阻理論探討老年性癡呆(AD)的發(fā)病機(jī)理和治療法則，并期望建立一種新的AD大鼠模型，通過觀察補(bǔ)腎化痰法對該模型大鼠學(xué)習(xí)記憶水平、腦組織病理形態(tài)、膽堿能系統(tǒng)和泛素-蛋白酶體通路相關(guān)指標(biāo)的影響，探討補(bǔ)腎化痰法對該AD模型的干預(yù)作用和作用機(jī)理，為中醫(yī)藥防治AD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1．15月齡Wistar大鼠60只，隨機(jī)分為4組，即正常老年組、Aβ<,25-35>模型組、IBO模型組、Aβ<,25-35

2、>+IBO模型組，每組15只。大鼠雙側(cè)前腦基底核(BNM)分別注射Aβ<,25-35>、IBO和Aβ<,25-35>+IBO 構(gòu)建不同AD 大鼠模型，用 Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察實(shí)驗(yàn)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，六胺銀染色方法觀察腦組織神經(jīng)纖維纏結(jié)，甲醇剛果紅法觀察腦組織老年斑，以建立并評價Aβ<,25-35>+IBO復(fù)合 AD 模型，作為后續(xù)研究的基礎(chǔ)。 2．15月齡Wistar大鼠70只，隨機(jī)分為7組，即正常組、假手術(shù)組、模型組、哈

3、伯因治療組、補(bǔ)腎化痰方高、中、低劑量組，每組10只。大鼠雙側(cè)前腦基底核注射Aβ<,25-35>+IBO構(gòu)建 AD 模型。動物經(jīng)補(bǔ)腎化痰方干預(yù)28天后，各組大鼠進(jìn)行 Morris 水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，六胺銀染色法觀察腦組織神經(jīng)纖維纏結(jié)，甲醇剛果紅法觀察腦組織老年斑，透射電鏡觀察海馬區(qū)超微病理改變，并用放射免疫法檢測大鼠海馬和皮質(zhì)區(qū) Ach、AchE和ChAT活性變化，用免疫組織化學(xué)法和RT-PCR法檢測海馬和皮質(zhì)區(qū)泛素蛋白水平，ELISA法

4、和免疫印跡法檢測泛素相關(guān)蛋白E1、N端和C端蛋白水平。 結(jié)果： 1．無論從反映空間學(xué)習(xí)記憶獲取能力的定位航行實(shí)驗(yàn)，還是從反映信息貯存能力的空間搜索實(shí)驗(yàn)來看，各造模方法均能有效地降低實(shí)驗(yàn)大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，兩單因素模型組之間沒有太大差別，復(fù)合模型組則更明顯地表現(xiàn)出 AD 病人的學(xué)習(xí)記憶障礙特點(diǎn)。病理形態(tài)上，IBO 模型組主要表現(xiàn)為較明顯的腦神經(jīng)元變性，Aβ<,25-35>組則可見到神經(jīng)纖維纏結(jié)和淀粉樣蛋白沉積斑塊，復(fù)合模型

5、腦組織則出現(xiàn)嚴(yán)重點(diǎn)狀中斷，可見大量空泡形成。淀粉樣蛋白沉積斑塊和神經(jīng)纖維纏結(jié)明顯增多。 2．西藥組和中藥組的平均潛伏期較模型組有明顯縮短(P<0.01)。高、中、低劑量組的象限百分比較模型組有明顯提高(P<0.01)，20％、40％區(qū)域較模型組有明顯減少(P<0.01)；模型組大鼠空間探索的象限百分比和跨過原平臺位置次數(shù)與正常組和假手術(shù)組比明顯降低(P<0.01)。各治療組的象限百分比和跨過原平臺位置次數(shù)較模型組有明顯提高(P<

6、0.01)，并呈現(xiàn)一定量效關(guān)系(P<0.01)。 3．模型組腦組織 Ach 和 ChAT 與正常組相比均顯著減少(P<0.01)，AchE 活性則明顯升高(P<0.01)。Ach 結(jié)果正常組與空白組無差異(P>0.05)。與模型組比，中藥各組均有顯著性差異(P<0.01)。西藥組 Ach 與中低劑量比有差異(P<0.01)，但與高劑量組比無差異(P>0.05)。從ChAT和AchE活性檢測結(jié)果看，兩者在各組比較一致，各治療組與模

7、型組比均有顯著差異(P<0.01)，低劑量與西藥組比有差異(P<0.05)，與中高劑量無差異(P>0.05)。各中高劑量比也無差異(P>0.05)。 4．對大鼠海馬和皮質(zhì)Ub、E1、E2-EPF和PGP9.5含量檢測結(jié)果表明，ELISA和免疫印跡兩種檢測方法結(jié)果基本一致，模型組 Ub和E2-EPF蛋白含量顯著升高(P<0.01或P<0.05)，E1和PGP9.5含量顯著降低(P<0.01或P<0.05)，中藥各組能有效的提高動物

8、海馬和皮質(zhì)區(qū)Ub、E1、E2-EPF和PGP9.5蛋白含量(P<0.01或P<0.05)，高、中、低劑量存在一定量效關(guān)系(P<0.01或P<0.05)。 結(jié)論： 1．腎虛痰阻是老年性癡呆的基本病機(jī)，補(bǔ)腎化痰法是其有效治法。 2．Aβ<,25-35>+IBO復(fù)合模型更接近的模擬AD患者的臨床表現(xiàn)和基本病理特征，是一種可靠的動物模型。 3．補(bǔ)腎化痰法能有效改善模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力；提高AD模型大鼠海馬 ChA