補腎化痰方對Alzheimer病模型大鼠小膠質細胞介導的免疫機制研究.pdf

1、目的： 在自然衰老大鼠的基礎上復合Aβ25-35＋IBO建立AD大鼠動物模型，通過觀察補腎化痰方對該模型大鼠學習記憶水平、腦組織病理形態(tài)、膽堿能系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)相關指標的影響，探討補腎化痰方對該AD模型的干預作用和作用機理，為中醫(yī)藥防治AD提供實驗依據(jù)。 方法： 15月齡Wistar大鼠70只，隨機分為7組，即正常組、假手術組(簡稱空白組)、模型組、哈伯因治療組(簡稱西藥組)、補腎化痰方高、中、低劑量治療組(簡稱高

2、、中、低量組)，每組10只。應用腦立體定向技術給大鼠BNM注射凝聚態(tài)Aβ25-35＋IBO構建AD模型。注射2周后，高、中、低量組分別給大鼠不同濃度水煎液灌胃；西藥組用哈伯因混懸液灌胃；正常組、空白組、模型組均給予等容積的生理鹽水灌胃；28天后檢測各項指標。采用Morris水迷宮進行行為學評價，六胺銀染色方法觀察腦組織神經(jīng)纖維纏結，甲醇剛果紅染色法觀察老年斑，透射電鏡觀察海馬區(qū)超微病理改變，并用放射免疫法檢測大鼠海馬區(qū)和皮質區(qū)Ach、A

3、chE和ChAT活性變化，免疫組織化學法檢測大鼠腦組織小膠質細胞激活情況和酶聯(lián)免疫吸附法檢測大鼠腦組織TNF-α、IL-1β、IL-6水平，并觀察補腎化痰方對上述指標的影響，探討補腎化痰方干預作用及其可能作用機理。 結果： 1.行為學結果顯示高、中、低量組和西藥組的平均潛伏期較模型組有明顯縮短(P<0.01)；高、中量組的象限百分比較模型組有明顯提高(P<0.01)，20％、40％區(qū)域較模型組有明顯減少(P<0.01)；

4、模型組大鼠空間探索的象限百分比和跨過原平臺位置次數(shù)比正常組和空白組明顯降低(P<0.01)。西藥組和高、中、低量組的象限百分比和跨過原平臺位置次數(shù)較模型組有明顯提高(P<0.01)，并呈現(xiàn)一定量效關系(P<0.01)。 2.電鏡、光鏡觀察結果顯示模型組大鼠海馬神經(jīng)元減少和變性；補腎化痰方能改善AD大鼠海馬病理改變。 3.模型組海馬皮質區(qū)Aeh和ChAT與各組相比均顯著減少(P<0.01)，AchE活性則明顯升高(P<0.

5、01)；正常組與空白組無差異(p>0.05)；西藥組Ach與中、低量組比較有差異(P<0.01)，但與高量組比較無差異(p>0.05)。從ChAT和AchE活性檢測結果看，兩者在各組比較趨勢一致，西藥組和高、中、低量組與模型組比較均有顯著差異(P<0.01)，低量組與西藥組比較有差異(P<0.05)，與中、高量組無差異(p>0.05)。中、高量組比較也無差異(P>0.05)。 4.正常大鼠腦內小膠質細胞大多為靜息狀態(tài)，抗OX-4

6、2免疫組化染色為陰性，在切片上不易發(fā)現(xiàn)或細胞形態(tài)不清晰。假手術組創(chuàng)傷刺激后，激活轉化為早期反應狀態(tài)，可見OX-42淺染陽性細胞，細胞形態(tài)可見，但不規(guī)則，數(shù)量與正常組無差異(P>0.05)；模型組OX-42深染，OX-42陽性細胞形態(tài)清楚，胞體變大，數(shù)量顯著增多，與正常組有顯著性差異(P<0.01)；各治療組反應逐漸減弱， OX-42深染，陽性細胞數(shù)量逐漸減少，細胞形態(tài)變得模糊。數(shù)量上中量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.01)，西藥組

7、與高量組與模型組比較無差異(P>0.05)，高量組與中量組比較也有差異(P<0.01)。 5.正常組和假手術組IL-1β、IL-6和TNF-α含量無差異(P>0.05)；模型組IL-1β、IL-6和TNF-a的含量較正常組有顯著升高(P<0.01)：西藥組與模型組比較均無差異(p>0.05)。補腎化痰方低、高劑量組能降低模型組IL-1β含量(P<0.05)，中劑量效果更好(P<0.01)。中、低量組IL-6含量與模型組比較有顯著

8、性差異(P<0.01)，但高劑量與模型組比較無差異(p>0.05)。TNF-α結果顯示，只有中低劑量組與模型組比較有差異(P<0.05)，其它各治療組與模型組比均無差異(p>0.05)。 結論： 1.腎虛痰阻是AD的基本病機，補腎化痰法是治療AD的有效治法。 2.Aβ25-35＋IBO注射大鼠BNM建立的AD大鼠模型，較好的模擬了AD行為學及病理形態(tài)改變等特征，可作為AD大鼠模型。 3.補腎化痰方可顯著改