晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)及可溶性受體(sRAGE)在冠心病患者冠脈側(cè)支循環(huán)形成中的表達(dá)及意義.pdf

1、【背景】:
　　在糖尿病患者的研究中，晚期糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end-products，AGEs)與細(xì)胞表面的晚期糖基化終產(chǎn)物受體（receptor of advanced glycation end-products，RAGE）相互結(jié)合起著抑制血管增生的作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中也得出相同的結(jié)果[1，2]。但是，循環(huán)中可溶性 RAGE（soluble RAGE，sRAGE）因?yàn)槟芘c細(xì)胞表面RAGE競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合

2、AGEs，阻斷細(xì)胞表面RAGE與配體結(jié)合，從而sRAGE與AGE相互作用具有促進(jìn)血管增生及促進(jìn)冠脈側(cè)支循環(huán)（coronary collateral circulation,CCC）形成的作用[3]。
　　目前，AGEs和sRAGE的研究主要限于糖尿病患者及糖尿病動(dòng)物模型，尚未發(fā)現(xiàn)在糖尿病以外的人和動(dòng)物的相關(guān)研究。本研究選擇AGEs和sRAGE的原因是我們前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的蛋白芯片檢測(cè)所用的動(dòng)物模型是非糖尿病的側(cè)支循環(huán)形成動(dòng)物模型，而蛋

3、白芯片結(jié)果卻顯示血漿中RAGE有高表達(dá)，可能說(shuō)明AGEs和sRAGE相互作用不僅存在于糖尿病患者中，也可能廣泛存在于非糖尿病患者中。
　　【目的】:
　　探討AGEs和sRAGE在臨床冠心病患者側(cè)支循環(huán)形成良好與側(cè)支形成不良中的表達(dá)水平及可能影響因素，目的是篩選出新的、更強(qiáng)的有促進(jìn)側(cè)支循環(huán)形成作用的分子生物學(xué)標(biāo)志物，為冠心病診療提供新方法和理論依據(jù)。
　　【方法】
　　1.前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：結(jié)扎大鼠左前降支，建立側(cè)支

4、循環(huán)形成心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ停玫鞍仔酒瑱z測(cè)側(cè)支循環(huán)形成良好組及側(cè)支循環(huán)形成不良組血漿蛋白表達(dá)差異，篩選出可能與側(cè)支循環(huán)形成相關(guān)的蛋白因子，本研究主要在臨床病人中擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證檢驗(yàn)。
　　2.臨床標(biāo)本采集與資料收集：按常規(guī)方法操作進(jìn)行冠脈造影（Coronary angiography，CAG），血管穿刺成功后抽取動(dòng)脈血,加入EDTA-K2抗凝管中。選取2ml全血標(biāo)本分2管，低溫-80度保存，余下血標(biāo)本離心后取上層血漿分2管，低溫-

5、80度保存待檢。
　　選取冠脈造影發(fā)現(xiàn)三大主支中至少有一支冠脈大分支(左前降支、左回旋支、右冠)狹窄≥90%的患者，分為冠脈側(cè)支循環(huán)形成良好組、冠脈側(cè)支循環(huán)形成不良組各30例；同時(shí)以冠脈造影顯示無(wú)冠狀動(dòng)脈硬化者30例作為對(duì)照組。收集研究對(duì)象臨床資料輸入 SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件包中，包括患者年齡、性別、入院時(shí)血壓、一般生化指標(biāo)、高血壓史、糖尿病史等等。
　　3.ELISA分析：定量檢測(cè)血漿中AGEs及sRAGE的含量，采用雙

6、抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
　　4.Western Blotting檢測(cè)：另一管中血漿標(biāo)本用Western Blotting檢測(cè)AGEs和sRAGE水平。
　　（1）蛋白濃度測(cè)定：用Bradford比色法、紫外分光光度計(jì)檢測(cè)，于A595處吸光值讀取蛋白含量。
　?。?）蛋白質(zhì)分離：本研究采用12%SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行蛋白質(zhì)分離。
　?。?）電轉(zhuǎn)移：本研究采用水浴式電轉(zhuǎn)移。

7、
　?。?）免疫檢測(cè)
　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，分析側(cè)支循環(huán)形成良好、側(cè)支形成不良及對(duì)照組患者血漿中AGE及sRAGE表達(dá)水平及差異，并分析其影響因素如心血管病危險(xiǎn)因素、性別、年齡、血生化等指標(biāo)。
　　【結(jié)果】:
　　1.在非糖尿病側(cè)支循環(huán)形成心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ椭?，用蛋白芯片檢測(cè)發(fā)現(xiàn)血漿 RAGE高表達(dá)。
　　2. WB及ELISA驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果均顯示：在糖尿病及非糖尿病患者

8、中，CCC形成良好組與CCC形成不良組的AGEs及sRAGE表達(dá)均高于正常對(duì)照組。對(duì)于糖尿病患者，與對(duì)照組相比，CCC形成良好組AGEs及sRAGE（AGEs：0.312±0.018 vs0.192±0.055，sRAGE：0.244±0.103 vs0.161±0.028）；及CCC形成不良組AGEs及sRAGE（AGEs：0.370±0.090 vs0.192±0.055，sRAGE：0.272±0.061 vs0.161±0.02

9、8）的表達(dá)水平均明顯升高（P均＜0.05）。同樣，對(duì)于非糖尿病患者，與對(duì)照組相比，CCC形成良好組AGEs及sRAGE（AGEs：0.361±0.032 vs0.167±0.021，sRAGE：0.235±0.061 vs0.133±0.013）；及 CCC形成不良組 AGEs及 sRAGE（AGEs：0.332±0.138 vs0.167±0.021，sRAGE：0.223±0.055 vs0.133±0.013）的表達(dá)水平也明顯升高

10、（P均＜0.05）。
　　而CCC良好組與CCC形成不良組比較，糖尿病及非糖尿病患者的AGEs及sRAGE表達(dá)則有所不同，在糖尿病患者，CCC形成良好組AGEs及sRAGE表達(dá)有低于CCC形成不良組傾向（AGEs：0.312±0.018 vs0.370±0.090，sRAGE：0.244±0.103 vs0.272±0.061），但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）；而在非糖尿病患者，CCC形成良好組AGEs及sRAGE表達(dá)有高

11、于CCC形成不良組傾向（AGEs：0.361±0.032 vs0.332±0.138，sRAGE：0.235±0.061 vs0.223±0.055），但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。
　　3.單因素分析中，男性、高血壓患者、hs-CRP水平越高、頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度越厚、頸動(dòng)脈斑塊大小、冠脈狹窄程度，在三組之間的比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；多因素 Logistic分析：頸動(dòng)脈斑塊大小、冠脈狹窄程度與側(cè)支循環(huán)形成

12、相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P'＜0.05）。而年齡、吸煙史、糖尿病病史、MPV、脂蛋白a、LDL、膽固醇、甘油三酯水平、左房?jī)?nèi)徑、室間隔厚度、左室后壁厚度、肺動(dòng)脈高壓、LVEF值與CCC形成無(wú)明顯相關(guān)（P＞0.05）。
　　【結(jié)論】:
　　1.在非糖尿病動(dòng)物試驗(yàn)中，蛋白芯片顯示側(cè)支循環(huán)形成良好組sRAGE表達(dá)增高；
　　2.本組資料顯示：在糖尿病及非糖尿病冠心病患者中，CCC形成良好組與CCC形成不良組血漿AGEs、sR

13、AGE表達(dá)均顯著增高，提示AGEs、sRAGE可能與側(cè)支循環(huán)形成相關(guān)；亞組分析顯示，在糖尿病患者中，血漿AGEs、sRAGE表達(dá)與CCC分級(jí)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系傾向，而在非糖尿病患者中，AGEs、sRAGE表達(dá)與CCC分級(jí)呈正相關(guān)關(guān)系傾向，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其機(jī)制不明，是否與樣本量較小有關(guān)，有待進(jìn)一步研究；
　　3.本組資料顯示：男性、高血壓、hs-CRP水平越高、頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度越厚、頸動(dòng)脈斑塊大小、冠脈狹窄程度，與CCC形成密切相