子癇前期患者胎盤組織中晚期糖基化終產(chǎn)物受體、P-選擇素的基因表達及意義.pdf

1、背景與目的:
　　 子癇前期(preeclampsia PE)為妊娠期高血壓疾病中的一種,是妊娠期特有疾病,是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦及圍生兒死亡的一個重要原因,因而多年來一直是國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點課題。子癇前期的病因和發(fā)病機制及其復(fù)雜,且至今尚無統(tǒng)一的觀點。近年來炎癥反應(yīng)在子癇前期發(fā)病機制中的作用逐漸受到重視,體內(nèi)外各種影響因素導(dǎo)致胎盤氧化應(yīng)激,釋放大量胎盤炎性因子,從而導(dǎo)致炎癥反應(yīng)和血管內(nèi)皮細胞受損的發(fā)生,此機制受到目前國內(nèi)外許多學(xué)者的認(rèn)

2、可。
　　 P-選擇素(P-selectin)被稱為參與炎癥反應(yīng)的典型黏附分子代表,是啟動炎癥反應(yīng)和維持炎性狀態(tài)的一個關(guān)鍵因素。它是細胞黏附分子(cell adhesionmolecules cAMs)中選擇素家族的主要成員,通常儲存在內(nèi)皮細胞的分泌顆粒、靜止的血小板顆粒及致密顆粒中,當(dāng)其受到組胺、凝血酶、缺氧及氧化應(yīng)激等刺激時,表達量可迅速增高,參與炎癥反應(yīng)的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn),妊娠期間P-selectin在母胎界面的細胞內(nèi)表達,

3、當(dāng)其在體內(nèi)的表達明顯增加時,可激活血小板,釋放大量血小板活化因子(PAF),增強炎癥反應(yīng),激活多核巨細胞(RMN),進而破壞內(nèi)皮細胞的結(jié)構(gòu)和完整性,導(dǎo)致微血管堵塞及血管收縮功能障礙,胎盤供血量明顯減少,胎兒的生長發(fā)育受到限制。這可能是子癇前期發(fā)生、發(fā)展的主要病理機制之一。
　　 晚期糖基化終產(chǎn)物受體(recepor of advanced glycation end products RAGE)是免疫球蛋白超家族的成員,是典型的

4、單跨膜片段受體。人RAGE基因位于6號染色體上(6p21.3),有近400個氨基酸殘基組成。RAGE功能復(fù)雜,可與多種配體結(jié)合,通過細胞P21Ras、分裂原激活蛋白激酶(MAPK)、cdc42／rac、JAK(Janus激酶)／STAT(信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor-κBNF-κ B)等多種傳導(dǎo)通路激活細胞內(nèi)部各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制,誘導(dǎo)細胞結(jié)構(gòu)和功能紊亂,參與多種疾病的發(fā)生。Cooke等報道,正常

5、孕婦胎盤、子宮肌層內(nèi)均有RAGE的表達,并且子癇前期患者的RAGE表達明顯高于正常孕婦。另外,RAGE的配體在子癇前期患者血清及胎盤中的表達也明顯升高,提示RAGE可能參與了在子癇前期的病理過程。
　　 本文運用免疫組化SP法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測定正常孕婦和子癇前期患者胎盤組織中RAGE、P-selectin表達水平的變化,研究兩因子在正常孕婦和子癇前期患者胎盤組織中的分布和表達情況,從而探討兩因子與子癇前期發(fā)

6、病及病情程度的相關(guān)性。
　　 材料與方法:
　　 1、臨床病歷資料
　　 選擇2009年5月至2009年12月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科住院的子癇前期患者40例(輕度患者20例,重度患者20例)作為實驗組,平均年齡29.5±4.8歲,平均孕周36.5±2.4周,孕次2.3±0.4次；取同期30例正常孕婦為對照組,平均27.2±2.4歲,平均孕周38.5±4.6周,孕次2.1±0.6次。正常孕婦與輕、重度子癇前期

7、患者年齡、身高、體重等一般資料經(jīng)檢驗無統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.10)。所選對象均無近期感染,無高血壓、糖尿病、腎病、反復(fù)流產(chǎn)史及免疫性疾病等病史,無其他妊娠合并癥及并發(fā)癥。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《婦產(chǎn)科學(xué)》第7版。分娩方式均為剖宮產(chǎn),陰道分娩者未入選。
　　 2、實驗方法
　　 運用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR法)從基因水平分別檢測正常孕婦和子癇前期患者胎盤組織中RAGE和P-selectin mRNA的表達,應(yīng)用免疫組織化學(xué)法(

8、SP法)從蛋白水平水平分別檢測正常孕婦和子癇前期患者胎盤組織中RAGE和P-selectin蛋白的表達。
　　 3、統(tǒng)計學(xué)分析
　　 本數(shù)據(jù)采用SPSS16.0系統(tǒng)軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理,各組胎盤組織中RAGE,P-selectin mRNA和蛋白的表達采用方差分析,組間比較采用LSD-t檢驗,相關(guān)性分析用Spearman相關(guān),檢驗水準(zhǔn)a=0.05。
　　 結(jié)果:
　　 1、免疫組化染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)RAGE在各組

9、胎盤滋養(yǎng)細胞中均有陽性表達,血管內(nèi)皮細胞中也有少量表達,P-selectin主要表達于合體滋養(yǎng)細胞、血管內(nèi)皮細胞及間質(zhì)細胞。
　　 實驗組胎盤組織中RAGE、P-selectin的平均灰度值分別為:輕度子癇前期組121.10±13.01、125.86±9.13,重度子癇前期組152.06±12.31、161.09±11.37,對照組胎盤組織中RAGE、P-selectin的平均灰度值分別為101.08±6.72、106.54±9

10、.53；實驗組明顯高于對照組,且重度子癇前期組高于輕度子癇前期組(FRAGE=250.125,FP-selecting=274.044,P<0.01)。
　　 2、RT-PCR結(jié)果為實驗組RAGE、P-selectin mRNA的相對表達量分別為:輕度子癇前期組0.455±0.059、0.417±0.052,重度子癇前期組0.863±0.097、0.763±0.049,對照組二者mRNA的相對表達量分別為:0.234±0.019

11、、0.318±0.026；實驗組高于對照組且重度子癇前期組高于輕度子癇前期組(FRAGE=624.55,FP-selecting=708.35,P<0.05),與組織化學(xué)分析結(jié)果一致。
　　 3、經(jīng)相關(guān)性分析顯示:子癇前期患者胎盤中RAGE蛋白的表達與P-selectin的蛋白的表達成正相關(guān)(r輕度=0.513,r重度=0.796,P<0.05)；且RAGE與P-selectinmRNA的表達成正相關(guān)(r輕度=0.607,r重度

12、=0.814,P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、RAGE蛋白及RAGE mRNA在子癇前期患者胎盤組織中的表達高于正常孕婦組,提示其高表達在子癇前期的發(fā)生、發(fā)展中具有一定作用。
　　 2、P-selectin蛋白及P-selectin mRNA在子癇前期患者胎盤組織中的表達高于正常孕婦組,提示其高表達與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。
　　 3、RAGE、P-selectin在子癇前期的患者胎盤組織