丹參酮ⅡA磺酸鈉通過(guò)SIRT1-FOXO3a通路改善低氧性肺動(dòng)脈高壓.pdf

1、目的：觀察丹參酮ⅡA磺酸鈉（STS）對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓（HPH）的影響，并探討SIRT1-FOXO3a通路在其中的作用機(jī)制。
　　方法：將購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心的SD大鼠隨機(jī)分為3組，每組各8只，分別為常氧組、低氧組、低氧+STS組。低氧組及低氧+STS組SD大鼠飼養(yǎng)于常壓低氧箱內(nèi)，其氧濃度控制在（10±0.5）％，常氧組大鼠呼吸正?？諝猓c低氧組、低氧+STS組大鼠放于同一房間以相同飼料飼養(yǎng)。于造模開(kāi)始起，低氧+STS組大

2、鼠每日腹腔注射STS10mg/kg，常氧組及低氧組大鼠注射相同劑量的生理鹽水，連續(xù)8周。造模結(jié)束后分析比較三組大鼠右心肥厚指數(shù)（RVHI），平均肺動(dòng)脈壓力（mPAP）等指標(biāo)，觀察肺小動(dòng)脈HE染色等，分析STS對(duì)HPH的影響。
　　體外培養(yǎng)原代人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（hPASMCs），取5～8代作為實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞。首先將hPASMCs設(shè)為6組，分別為常氧組、低氧組、低氧+不同濃度STS（0.1μmol/L,1.25μmol/L,12.5μm

3、ol/L,25μmol/L）干預(yù)組，常氧組為37℃、5%CO2和95%空氣的培養(yǎng)箱內(nèi)孵育24h，低氧組及低氧+不同濃度STS干預(yù)組分別置于37℃、3%O2、5%CO2、92%N2的三氣培養(yǎng)箱內(nèi)孵育24h。行MTT實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞增殖情況，分析低氧及STS對(duì)hPASMCs的影響，并篩選最佳STS干預(yù)濃度。
　　重新取5～8代hPASMCs并將其設(shè)為5組，分別為常氧組、低氧組、低氧+STS（25μmol/L）組、低氧+白藜蘆醇（RE，40

4、μmol/L)組、低氧+STS（25μmol/L）+尼克酰胺（NAM，200μmol/L)組。不同干預(yù)因素處理后,再次比較細(xì)胞增殖情況，并采用蛋白免疫印跡（Western blot）和實(shí)時(shí)定量(RT)-PCR分別檢測(cè)各組SIRT1、FOXO3a、PCNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：長(zhǎng)期慢性低氧可導(dǎo)致SD大鼠肺動(dòng)脈管壁增厚，mPAP增高， RVHI增高，肺動(dòng)脈中膜增厚，應(yīng)用STS干預(yù)后可明顯降低上述指標(biāo)的改變程度，改善HPH。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

5、中，低氧可顯著刺激hPASMCs增殖，應(yīng)用STS及SIRT1激動(dòng)劑RE干預(yù)后，hPASMCs中SIRT1及FOXO3a表達(dá)同向增加，PCNA表達(dá)減少，hPASMCs增殖減少。而應(yīng)用SIRT1抑制劑NAM處理后，SIRT1及FOXO3a表達(dá)減少，細(xì)胞增殖活躍，提示NAM在一定程度上削弱了 STS通過(guò) SIRT1-FOXO3a通路發(fā)揮抑制hPASMCs增殖的作用。
　　結(jié)論：長(zhǎng)期慢性低氧可引起并加重大鼠肺動(dòng)脈高壓，應(yīng)用STS治療后，肺