SIRT1-FOXO3a介導(dǎo)雌激素對低氧性肺動脈高壓的保護(hù)作用.pdf

1、目的：探討SIRT1-FOXO3a在雌激素（E2）抑制低氧性肺動脈高壓、肺血管重塑和肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖中的作用。
　　方法：動物水平將卵巢切除后的SD大鼠隨機分為4組（各組n=8）：常氧組、常氧+E2組、低氧組、低氧+E2組。常氧+E2組、低氧+E2組皮下注射17β-雌二醇[20μg/(kg·d)]，其他組皮下注射生理鹽水（0.1 ml/d）。低氧組大鼠置于低氧箱內(nèi)飼養(yǎng)，非低氧組大鼠呼吸正常空氣。連續(xù)飼養(yǎng)8周以建立低氧性肺動脈高

2、壓模型。觀察對比各組大鼠的平均肺動脈壓（mPAP）、右心室肥厚指數(shù)（RVHI）、肺小動脈重塑等指標(biāo)，并用酶聯(lián)免疫法測定血清E2水平，免疫組化法檢測沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1（SIRT1）、FOXO3a轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞核增殖抗原(PCNA)在肺動脈中的表達(dá)。SIRT1活性比色法測定肺組織中SIRT1酶活性。體外培養(yǎng)人肺動脈平滑肌細(xì)胞(hPASMCs)，首先給予常氧、低氧、不同濃度雌激素干預(yù)，行MTT實驗測定細(xì)胞增殖情況。其次低氧組細(xì)胞用尼克

3、酰胺( NAM，SIRT1抑制劑)和E2共處理或用白藜蘆醇( RE，SIRT1激動劑)處理后，再次觀察細(xì)胞增殖情況，并采用蛋白免疫印跡（Western blot）和實時定量（RT）-PCR分別檢測SIRT1、FOXO3a、PCNA的表達(dá)情況。SIRT1活性比色法測定細(xì)胞中SIRT1酶活性。
　　結(jié)果：慢性低氧明顯增加了大鼠 mPAP、RVHI、肺小動脈厚度，同時伴隨肺動脈SIRT1的表達(dá)下降，F(xiàn)OXO3a表達(dá)減少，PCNA表達(dá)增加

4、。E2處理后明顯抑制了低氧對mPAP和RVHI的升高，降低了肺動脈重塑指標(biāo)，并改善了低氧對上述指標(biāo)表達(dá)的改變。在體外，E2明顯抑制了低氧誘導(dǎo)的hPASMCs增殖，同時也上調(diào)了SIRT1的表達(dá)，提高了FOXO3a的表達(dá)。另外，SIRT1的抑制劑顯著削弱了E2對hPASMCs增殖的抑制作用及對FOXO3a表達(dá)的促進(jìn)作用；而SIRT1的激動劑RE模擬了E2的上述作用。
　　結(jié)論：E2能有效改善大鼠低氧性肺動脈高壓和肺血管重塑，該作用可能