紫色光合菌LHIpufBA突變體的研究.pdf

1、Thermochromatium(Tch.）tepidum光合作用單位由捕光色素蛋白復(fù)合體Ⅰ(light-harvestingⅠ，LHⅠ)、捕光色素蛋白復(fù)合體Ⅱ（Iight-harvestingⅡ，LHⅡ）和光反應(yīng)中心RC(Reaction Center)組成。研究發(fā)現(xiàn)，Tch.tepidum LHⅠ-Qy特征吸收峰是在915nm處，與其它的光合作用細菌約880nm處相比較，在長波長方面存在35nm的紅移，紅移的原因尚不清楚。
　

2、　本研究利用分子生物學和光譜分析的方法，體外克隆Tch.tepidum pufBA序列，并對該序列進行丙氨酸定點突變，將突變后的pufBA序列構(gòu)建于pRK404重組表達載體上（含Rhodobacter sphaeroide pufQ、pufK、pufL、pufM、pufX），通過接合轉(zhuǎn)移把表達質(zhì)粒導(dǎo)入Rhodobacter(Rb.)sphaeroides變異株RbsΔQ-X（基因組缺失pufQ-X）中，并對突變接合子的最佳培養(yǎng)條件和四環(huán)

3、素抗性濃度進行優(yōu)化，分析其表達特性。
　　結(jié)果表明:突變的Tch.tepidum pufBA在Rb.sphaeroides中能夠正常表達，但其表達量較低;光譜吸收表明突變接合子的菌液在896nm附近有特征吸收峰;突變接合子的最佳四環(huán)素抗性濃度為20μg/mL，較好的培養(yǎng)條件為24℃、90rpm、兼性厭氧、弱光，目前還在進一步探索突變接合子的最佳培養(yǎng)條件。Tch.tepidum LHⅠ異源蛋白的正常表達，有助于其晶體結(jié)構(gòu)的研究，同時