西瓜嗜酸菌鞭毛突變體的篩選及功能研究.pdf

1、本研究利用三親雜交技術將帶有卡那霉素抗性的Tn5轉座子轉到果斑病菌A13和3號菌株中，分別獲得菌株A13轉化克隆子1036個，菌株3轉化741個，共計1777個克隆子，并分別隨機挑選60個進行果斑病菌和卡那基因驗證，所驗證的克隆子均能擴增到一條條帶（果斑病菌360bp，卡那基因586bp）說明所獲得克隆子均為果斑病病菌，而且均帶有 Tn5轉座子，從而成功構建了果斑病菌菌株A13和3的突變體庫。
　　利用平板游動性檢測法對獲得的17

2、77克隆子進行篩選，結果表明從1777個突變子中篩選得到45株游動性出現不同程度減弱的突變株，其中從A13突變株中篩選到游動性減弱的有30株，而明顯減弱的有3株；從菌株3號克隆子中篩選到游動性減弱的菌株有15株；對這45株游動性減弱的突變株進行致病性測定，結果表明喪失致病性的菌株有5株，致病性減弱的有5株，致病性沒有發(fā)生變化的菌株有35株。本研究從上述篩選結果中選出3株（菌株438、561和567）游動性顯著減弱的菌株進行鞭毛的形態(tài)特征

3、、致病性、過敏性反應、生長能力、群體感應信號、生物膜、胞外多糖等研究，結果如下：
　　（1）電鏡觀察結果表明菌株438的鞭毛較野生型菌株短、菌株561的鞭毛完全喪失，而菌株567的鞭毛較野生菌株細；（2）致病性測定發(fā)現鞭毛變短和缺失的突變體（438和561）喪失了致病性，而鞭毛變細的突變體（567）致病性與野生菌株相同；（3）過敏性測定結果表明鞭毛變短和缺失的突變體不能激發(fā)煙草的過敏性反應，而鞭毛細的突變體與野生型菌株相同，可以激