2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、疏綿狀嗜熱絲孢菌(Thermomyces lanuginosus)是一種廣泛分布的嗜熱真菌,是真核生物中生長(zhǎng)上限溫度最高的一種真菌,從該菌中已分離了多種嗜熱酶,并進(jìn)行了真核表達(dá),使得該菌種在工、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和微生物研究中的作用越來(lái)越大。目前,對(duì)該嗜熱菌感受和傳導(dǎo)信號(hào)的機(jī)制尚不清楚。蛋白激酶基因pspk是我們從疏綿狀嗜熱絲孢菌中分離得到的一種新的蛋白激酶基因,其具體的功能尚需進(jìn)行研究分析。通過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化,向菌株基因組隨機(jī)插入外源質(zhì)粒DNA,構(gòu)建

2、該菌的突變體,對(duì)探索該菌的嗜熱性機(jī)制具有重要意義。
  本實(shí)驗(yàn)室利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化法已成功建立了疏綿狀嗜熱絲孢菌的遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng),為研究基因的功能,分離功能基因提供了重要的手段,也為外源基因在其體內(nèi)的表達(dá)提供了有效地途徑。另外,利用亞細(xì)胞定位的方法,將該基因與GFP基因的融合表達(dá)載體pROKⅡ-GFP-pspk轉(zhuǎn)化至洋蔥表皮細(xì)胞并使其進(jìn)行表達(dá),在熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光出現(xiàn)在細(xì)胞核的位置,推測(cè)該蛋白激酶在洋蔥表皮亞細(xì)胞定位的部位

3、為細(xì)胞核。首先利用已成功構(gòu)建的疏綿狀嗜熱絲孢菌的遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng),通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法篩選大量突變體,獲得多株表型各異的突變體。這些突變體在菌落形態(tài)、顏色、產(chǎn)孢量等方面與野生菌株具有明顯差異。這就為研究基因的功能,分離功能基因提供了材料,為探索該嗜熱菌的耐熱機(jī)制提供材料。本實(shí)驗(yàn)以疏綿狀嗜熱絲孢菌蛋白激酶為研究對(duì)象,構(gòu)建了其表達(dá)載體pROKⅡ-hph-pspk,并對(duì)本實(shí)驗(yàn)室已成功構(gòu)建的疏綿狀嗜熱絲孢菌的遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)進(jìn)行優(yōu)化。最終確定農(nóng)桿菌菌株LB

4、A4404在孢子萌發(fā)4.5h,孢子濃度為5×106個(gè)/皿,共培養(yǎng)時(shí)AS濃度為250μmol/L時(shí),表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化效率達(dá)到最高。利用熒光定量技術(shù),確定蛋白激酶基因pspk在轉(zhuǎn)化菌株中的表達(dá)量是野生菌株的1.729倍,證明獲得了蛋白激酶基因的過(guò)量表達(dá)的菌株。對(duì)得到的過(guò)量表達(dá)菌株進(jìn)行生物表型分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)過(guò)量表達(dá)的菌株具有一致的生物表型特征,且其耐熱性比野生菌株明顯降低。通過(guò)以上研究初步推測(cè)蛋白激酶基因pspk可能與菌體的耐熱功能相關(guān),有助于

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