Fn14在上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移中作用的研究.pdf

1、目的：比較人上皮性卵巢癌細(xì)胞株HO8910和其配對(duì)高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株HO8910-PM中Fn14的表達(dá)情況及探討Fn14在上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機(jī)制。
　　方法：⑴Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞株體外遷移和侵襲能力；⑵Western blot法檢測(cè)HO8910、HO8910-PM細(xì)胞株中Fn14的表達(dá)情況；⑶免疫熒光法檢測(cè)定HO8910、HO8910-PM細(xì)胞株中Fn14蛋白熒光的強(qiáng)弱；⑷構(gòu)建Fn14表達(dá)質(zhì)粒，通過lipofe

2、ctamin2000法轉(zhuǎn)染至HO8910-PM細(xì)胞并檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率；⑸Tranwell法檢測(cè)HO8910-PM細(xì)胞轉(zhuǎn)染Fn14表達(dá)質(zhì)粒后遷移能力和侵襲能力的變化；⑹CCK-8法檢測(cè)HO8910-PM細(xì)胞轉(zhuǎn)染Fn14表達(dá)質(zhì)粒后增殖能力的變化；⑺Western Blot檢測(cè)HO8910-PM細(xì)胞轉(zhuǎn)染Fn14表達(dá)質(zhì)粒后E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9蛋白的變化；⑻構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)Fn14的HO8910

3、-PM細(xì)胞株；⑼Slug表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HO8910-PM-Fn14細(xì)胞株，并檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率；⑽Tranwell法檢測(cè)HO8910-PM-Fn14細(xì)胞轉(zhuǎn)染Slug表達(dá)質(zhì)粒后遷移能力和侵襲能力的變化；⑾Western Blot檢測(cè)HO8910-PM-Fn14細(xì)胞株轉(zhuǎn)染Slug表達(dá)質(zhì)粒后細(xì)胞內(nèi)E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9蛋白的變化。
　　結(jié)果：HO8910-PM細(xì)胞的遷移和侵襲的細(xì)胞數(shù)均多

4、于HO8910細(xì)胞(P＜0.05)；HO8910-PM細(xì)胞中Fn14表達(dá)水平明顯低于HO8910細(xì)胞(P＜0.05)；HO8910細(xì)胞中的綠色熒光強(qiáng)度明顯高于HO8910-PM細(xì)胞(P＜0.05)；轉(zhuǎn)染Fn14-GFP表達(dá)質(zhì)粒后，HO8910-PM細(xì)胞表達(dá)綠色熒光（GFP）以及的Fn14的表達(dá)水平明顯升高；Fn14表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HO8910-PM細(xì)胞后，細(xì)胞的遷移和侵襲能力明顯降低；轉(zhuǎn)染Fn14表達(dá)質(zhì)粒不影響HO8910-PM細(xì)胞的增殖；

5、轉(zhuǎn)染Fn14表達(dá)質(zhì)粒后，E-cadherin表達(dá)水平上調(diào)、N-cadherin表達(dá)水平下調(diào)、Vimentin表達(dá)水平下調(diào)，同時(shí)腫瘤微環(huán)境中的MMP2、MMP9水平下降；HO8910-PM-Fn14細(xì)胞表達(dá)的綠色熒光（GFP）以及Fn14的表達(dá)水平明顯升高,穩(wěn)定表達(dá)Fn14的HO8910-PM細(xì)胞株構(gòu)建成功；HO8910-PM-Fn14細(xì)胞中Slug的表達(dá)水平下調(diào)；轉(zhuǎn)染Slug表達(dá)質(zhì)粒后，HO8910-PM-Fn14細(xì)胞表達(dá)紅色熒光以及S