克拉霉素聯(lián)合頭孢呋辛對兩種細菌防耐藥突變濃度及體內抗生素后效應的影響.pdf

1、目的:探討克拉霉素、頭孢呋辛單用及合用對金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌的體外抗菌作用、預防耐藥突變的能力和體內抗生素后效應。
　　方法:1.采用瓊脂平板倍比稀釋法和棋盤法分別測定克拉霉素、頭孢呋辛單用及聯(lián)用時對金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌的最小抑菌濃度(minimalinhibitory concentration，MIC)，并計算聯(lián)合指數(shù)(FIC):取濁度為1.0×107CFU·mL-1的菌懸液，分別接種于倍比稀釋的含不同濃度的克拉霉

2、素、頭孢呋辛及克拉霉素+頭孢呋辛的瓊脂平板上，每點接種1μl，放在35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h，觀察結果，肉眼觀察無細菌生長的最低藥物濃度為MIC。
　　2.采用瓊脂平板倍比稀釋法和簡易棋盤法測定克拉霉素、頭孢呋辛單用及聯(lián)用時對金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌的體外防耐藥突變濃度(mutantprevention concentrations，MPC)，并計算相應的選擇指數(shù)SI(MPC/MIC):肉湯法富集1010 CFU·mL-1的

3、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌菌懸液，取調好濁度的菌懸液0.1 ml分別加于倍比稀釋的含不同濃度的克拉霉素、頭孢呋辛及克拉霉素+頭孢呋辛的瓊脂平板上，用玻璃涂布器均勻涂布，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，以72 h無細菌生長的最低藥物濃度為MPC。
　　3.建立粒細胞減少小鼠股部金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌感染模型，并且應用平板菌落計數(shù)法測定克拉霉素、頭孢呋辛單用及聯(lián)合應用對金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌的體內抗生素后效應(Post antib

4、iotic effect，PAE):在實驗d1、d3，分別給小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺150 mg·kg-1、100 mg·kg-1，取去除抗生素的菌液0.1ml注入小鼠股部肌肉，于重建后0、1、2、3、4、6、8、10、12h分別處死6只小鼠，立即用預冷的滅菌生理鹽水按9∶1將小鼠股部肌肉制成勻漿，分別取10μl勻漿接種于M-H瓊脂平板，37℃孵育24 h，菌落計數(shù)得CFU·mL-1值，實驗管與未加藥對照管細菌的CFU·mL-1值高于零時1

5、0倍所需要的時間差(h)即為體內PAE。
　　結果:1.克拉霉素、頭孢呋辛單藥對金黃色葡萄球菌的MIC均為4.0μg·mL-1;聯(lián)合指數(shù)(FIC)為2.0，兩藥聯(lián)合后對金黃色葡萄球菌的體外抗菌效果為無關作用。克拉霉素、頭孢呋辛單藥對肺炎鏈球菌的MIC分別為0.0625μg·mL-1，16.0μg·mL-1;兩藥聯(lián)合指數(shù)(FIC)為2.0，聯(lián)合后對肺炎鏈球菌的體外抗菌效果為無關作用。
　　2.克拉霉素、頭孢呋辛單藥對金黃色葡萄

6、球菌的MPC分別是25.6μg·mL-1、51.2μg·mL-1; SI分別為6.4、12.8。聯(lián)合應用使克拉霉素的MPC由單獨使用時的25.6μg·mL-1下降為8.0μg·mL-1，SI由單獨使用時的6.4下降到為聯(lián)用后的2.0;同時聯(lián)合應用使頭孢呋辛的MPC由單獨使用時的51.2μg·mL-1下降為8.0μg·mL-1，SI由單獨使用時的12.8下降為聯(lián)用后的1.0。
　　克拉霉素、頭孢呋辛單藥對肺炎鏈球菌的MPC分別為10

7、24.0μg·mL-1、256.0μg·mL-1; SI分別為16384.0、16.0。聯(lián)合應用使克拉霉素的MPC由單獨使用時的1024.0μg·mL-1下降為0.03125μg·mL-1，SI由單獨使用時的16384.0下降為聯(lián)用后的0.5;同時聯(lián)合應用使頭孢呋辛的MPC由單獨使用時的256.0μg·mL-1下降為8.0μg·mL-1，SI由單獨使用時的16.0下降為聯(lián)用后的0.5。
　　3.克拉霉素、頭孢呋辛單用及聯(lián)用均對金黃

8、色葡萄球菌產生PAE。經統(tǒng)計分析，各組間比較差異均不顯著，克拉霉素與頭孢呋辛聯(lián)合應用的PAE為無關作用。
　　克拉霉素、頭孢呋辛單用及聯(lián)用均對肺炎鏈球菌產生PAE。經統(tǒng)計分析，相同濃度不同藥物間PAE比較，在藥物濃度為2 MIC，4 MIC時，克拉霉素組與克拉霉素+頭孢呋辛組的PAE差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);在藥物濃度為8 MIC時，克拉霉素組分別與頭孢呋辛組、克拉霉素+頭孢呋辛組之間的PAE差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.

9、05)。相同藥物不同濃度間PAE比較，克拉霉素組各濃度間PAE無差別;頭孢呋辛組與克拉霉素+頭孢呋辛組，藥物濃度為2MIC，8MIC時PAE差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。在低濃度時(2 MIC和4 MIC)，克拉霉素+頭孢呋辛組的PAE呈相加作用;而在8 MIC時，克拉霉素+頭孢呋辛組的PAE為無關作用。
　　結論:1.克拉霉素、頭孢呋辛聯(lián)合后對金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌的體外抗菌效果呈無關作用，聯(lián)合應用具有可行性。