Imipramine對(duì)小鼠急性肺損傷肺泡上皮屏障功能保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：
　　急性肺損傷（Acute Lung Injury,ALI）/急性呼吸窘迫綜合癥（Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS）均是呼吸內(nèi)科常見的危重疾患，且具有較高的病死率。目前，臨床上仍缺乏有效的治療措施。在ALI發(fā)生發(fā)展中最顯著的病理變化是彌漫性肺泡上皮細(xì)胞損傷，因此，增強(qiáng)肺泡上皮細(xì)胞屏障功能可成為治療ALI一個(gè)靶點(diǎn)。Imipramine是常見的三環(huán)類抗抑郁藥，也是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用的

2、酸性鞘磷脂酶（Acid Sphingomyelinase，ASMase）生物活性抑制劑，其具有抗炎、抗凋亡的作用。本文主要探討imipramine對(duì)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的小鼠ALI肺泡上皮屏障功能是否有保護(hù)作用，并探討其可能機(jī)制。
　　方法：
　　將SPF級(jí)雄性Balb/c小鼠隨機(jī)分為4組，即正常對(duì)照組、Imipramine組、LPS組、LPS+Imipramine組。采用LPS（20mg/kg）腹腔注射建立小鼠ALI模型，

3、并在腹腔注射LPS前30分鐘給予imipramine（25mg/kg）干預(yù)，處死前10 min，給予尾靜脈注射FITC-FD4，12 h后麻醉下放血處死小鼠，隨后取出支氣管肺泡灌洗液（BALF）及肺組織。常規(guī)HE染色觀察肺組織病理變化及病理學(xué)評(píng)分；肺組織濕/干比（W/D）和BALF/血清FD4比值的測(cè)定分別評(píng)估肺水腫和肺泡上皮細(xì)胞通透性；采用real-time PCR、Western blot和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)不同組緊密連接蛋白Oc

4、cludin、Claudin-4和ZO-1的表達(dá)情況；免疫熒光法檢測(cè)每組ASMase的生物活性。數(shù)據(jù)分析采用SPSS16.0軟件，多組間的均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　腹腔注射LPS誘導(dǎo)小鼠ALI，模型簡(jiǎn)單、穩(wěn)定且均勻，肺組織病理學(xué)變化符合ALI病理改變。正常對(duì)照組和Imipramine組小鼠肺組織病理學(xué)無明顯變化，LPS+Imipramine組肺組織病理學(xué)評(píng)分小于LPS組，差

5、異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；LPS+Imipramine組肺組織濕/干比小于LPS組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）；LPS+Imipramine組較LPS組相比，BALF/血清FD4比值下降差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P=0.002）；與LPS組相比，LPS+Imipramine組小鼠肺緊密連接蛋白Occludin、Claudin-4、ZO-1 mRNA及蛋白的表達(dá)水平均升高（P＜0.05）；免疫組化結(jié)果顯示，緊密連接蛋白Occl

6、udin、Claudin-4主要位于肺泡上皮細(xì)胞膜，ZO-1主要位于肺泡上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)，在正常對(duì)照組和Imipramine組蛋白表達(dá)明顯，LPS組蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），LPS+Imipramine組較LPS組蛋白表達(dá)有所恢復(fù)（P＜0.05）；免疫熒光法檢測(cè) ASMase活性結(jié)果顯示，LPS+Imipramine組較 LPS組相比，ASMase活性降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明Imipramine能抑制應(yīng)激狀態(tài)下A