腦出血急性期腦皮層蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　腦出血是卒中的一種毀滅性的方式，在亞洲國(guó)家每年腦出血的發(fā)生率被發(fā)現(xiàn)以2-3倍增長(zhǎng)。和白色人種相比中國(guó)人種被報(bào)道有更高的腦出血發(fā)生率。腦出血通常分為原發(fā)性和繼發(fā)性，在腦出血急性期，出血作為一個(gè)迅速擴(kuò)大的顱內(nèi)團(tuán)塊直接破壞神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)和直接壓縮周圍的組織造成傷害，這個(gè)時(shí)期進(jìn)行及時(shí)處理非常關(guān)鍵，可以阻止組織的進(jìn)一步損害，而找到急性期預(yù)示病情變化的標(biāo)志物也成了關(guān)鍵點(diǎn)。目前對(duì)腦出血標(biāo)志物的研究進(jìn)行了很多，但是仍沒有確定的、被臨床認(rèn)

2、可的標(biāo)記物。我們的研究基于以上的情況，對(duì)腦出血急性期各時(shí)間點(diǎn)的標(biāo)本進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究，獲得差異蛋白，并且通過western-blot進(jìn)行驗(yàn)證獲得標(biāo)記物蛋白及探索腦出血急性期可能的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：
　　采用在立體定向儀下腦內(nèi)注入自體血（尾動(dòng)脈血50ul）構(gòu)造腦出血模型，分別在腦出血后2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)（每組5只大鼠）取血腫同側(cè)腦皮層組織及正常大鼠腦皮層組織進(jìn)行蛋白裂解（450μl8M Urea和50μl的磷酸

3、酶抑制劑裂解）、純度測(cè)定（Bradford法）、還原烷基化、液相預(yù)分離（RIGOL L-3000高效液相色譜儀）、質(zhì)譜測(cè)定（Thermo質(zhì)譜儀）、數(shù)據(jù)庫(kù)檢索（Proteome Discoverer1.4；搜索引擎：MASCOT；數(shù)據(jù)庫(kù)：NCBI-rat ref-sequence protein database(60122 protein，updated on07-2015)、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理獲得差異蛋白。在獲得的差異蛋白中篩選出上調(diào)蛋白 n

4、eurofibromin1和下調(diào)蛋白 Ras-related protein Rab15，通過western-blot在同樣條件處理的組織樣品中驗(yàn)證其表達(dá)水平是否與質(zhì)譜篩選結(jié)果一致。
　　結(jié)果：
　　根據(jù)質(zhì)譜分析、數(shù)據(jù)庫(kù)檢索共獲得差異表達(dá)蛋白807個(gè)，根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與正常組對(duì)比具有明顯差異的上調(diào)蛋白169個(gè)，下調(diào)蛋白173個(gè)。根據(jù)Ratio值及P值重點(diǎn)篩查出上調(diào)蛋白3個(gè):NF1、Vgf、Ncs1，下調(diào)蛋白8個(gè)：Rab15、S

5、lcla4、Eps15、Arhgap21、Npdc1、Mycbp、Nrn1、Tp53rk。選取上調(diào)蛋白neurofibromin1，下調(diào)蛋白R(shí)as-related protein Rab15進(jìn)行western-blot，結(jié)果顯示腦出血后8小時(shí)內(nèi)蛋白neurofibromin1逐漸高表達(dá)，而蛋白R(shí)as-related protein Rab15是逐漸低表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1、腦出血急性期皮層神經(jīng)元蛋白表達(dá)有一定規(guī)律性，上調(diào)