Pannexin1-P2X7及自噬途徑介導(dǎo)apelin亞型和ELABELA對兔血小板聚集的影響.pdf

1、目的：Apelin、ELABELA多肽是APJ受體的內(nèi)源性配體，本課題擬探討apelin亞型apelin-12、apelin-13、apelin-17、apelin-36及ELABELA對兔血小板聚集的影響，研究Pannexin1(Panx1)半通道蛋白-P2X7途徑是否介導(dǎo)apelin-12、apelin-17、apelin-36、ELABELA促血小板聚集作用，自噬途徑是否介導(dǎo)apelin-13抑制兔血小板聚集的作用，發(fā)現(xiàn)Apeli

2、n亞型、ELABELA新生物學(xué)作用，為闡明血栓性疾病發(fā)生機(jī)理提供新的理論依據(jù)和藥物篩選靶點(diǎn)。
　　方法：
　　1、比濁法測定兔富血小板血漿血小板聚集；
　　2、Western blot檢測相關(guān)蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、Apelin-12（1*10-7～1.0μM）濃度依賴性促進(jìn)兔血小板聚集，其達(dá)峰濃度是51.5±6.6（％），半數(shù)有效濃度（median effective concertration,

3、EC50）為0.03981*10-3μM，達(dá)峰時(shí)間為36.3±15.6（s），達(dá)峰速率為3.9±1.4（%/s）；
　　2、Apelin-17（1*10-9～0.01μM）呈濃度依賴性地促進(jìn)兔血小板聚集，達(dá)峰濃度是50.1±4.5（%），半數(shù)有效濃度（EC50）為0.0014*10-3μM,26.1±7.1，達(dá)峰速率為2.9±0.9(%/s)；
　　3、Apelin-36（1*10-7～1.0μM）濃度依賴性地促進(jìn)兔血小板聚

4、集，達(dá)峰濃度是45.8±2.6（%），半數(shù)有效濃度（EC50）為0.18*10-3μM，達(dá)峰時(shí)間為22.9±6.8（s），達(dá)峰速率為3.1±0.8(%/s)；
　　4、ELABELA（0.001~1.0μM）濃度依賴性促進(jìn)兔血小板聚集，其達(dá)峰濃度是46.7±0.8（%），半數(shù)有效濃度（EC50）為0.028μM，達(dá)峰時(shí)間為31.7±13.8（s），達(dá)峰速率為3.6±1.1(%/s)；
　　5、Apelin-13（0.001～

5、1.0μM）濃度依賴性抑制ADP誘導(dǎo)的兔血小板聚集，半數(shù)抑制濃度（IC50）為0.0219μM；而apelin-13對膠原（collagen）、凝血酶（thrombin）和花生四烯酸（AA）誘導(dǎo)的兔血小板聚集沒有抑制作用；
　　6、Apelin-12促進(jìn)ADP和thrombin誘導(dǎo)血小板聚集，不影響collagen和AA誘導(dǎo)的兔血小板聚集。
　　7、Apelin-17對ADP、collagen和AA誘導(dǎo)的兔血小板聚集沒有促進(jìn)

6、作用，但促進(jìn)thrombin誘導(dǎo)的兔血小板聚集。
　　8、Apelin-36對ADP、collagen、thrombin、AA誘導(dǎo)的兔血小板聚集沒有影響。
　　9、ELABELA促進(jìn)ADP、collagen、AA誘導(dǎo)的兔血小板聚集，對thrombin誘導(dǎo)的兔血小板聚集沒有影響
　　10、APJ受體阻斷劑F13A減弱apelin-12、apelin-17、apelin-36、ELABELA誘導(dǎo)的兔血小板聚集；F13A減弱

7、apelin-13抑制兔血小板聚集作用；
　　11、Pannexin1抑制劑丙磺舒（Probenecid,Prb）和生胃酮（Carbenoxolone,Cbx）抑制apelin-12、apelin-17、apelin-36和ELABELA誘導(dǎo)的兔血小板聚集；
　　12、P2X7抑制劑亮藍(lán)（Brilliant blue G,BBG）抑制apelin-12、apelin-17、apelin-36和ELABELA誘導(dǎo)的兔血小板聚集

8、；
　　13、自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素（rapamycin，Rapa）減弱apelin-13對兔血小板聚集的抑制作用，而自噬抑制劑3MA增強(qiáng)apelin-13的抑制作用；同時(shí)，rapamycin促進(jìn)ADP誘導(dǎo)的兔血小板聚集，3MA抑制ADP誘導(dǎo)的兔血小板聚集；
　　14、Apelin-13不能阻斷apelin-12、apelin-17、apelin-36單獨(dú)或組合時(shí)誘導(dǎo)的兔血小板聚集。
　　結(jié)論：
　　1、Apelin