利多卡因通過cAMP-PKA信號(hào)通路負(fù)性調(diào)控NLRP3炎性體表達(dá).pdf

1、目的：觀察利多卡因?qū)χ嗵钦T導(dǎo)的急性炎癥反應(yīng)中 NLRP3炎性體表達(dá)的影響，探討其是否通過活化 cAMP/PKA信號(hào)通路負(fù)性調(diào)控脂多糖誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞NLRP3炎性體的表達(dá)。
　　方法：以THP-1細(xì)胞為研究對(duì)象，用佛波酯誘導(dǎo)為貼壁巨噬細(xì)胞，用LPS刺激構(gòu)建炎癥模型。將THP-1巨噬細(xì)胞隨機(jī)分為五組：a、空白對(duì)照組：常規(guī)培養(yǎng)的THP-1巨噬細(xì)胞；b、 Lidocaine組：20ug/ml利多卡因處理THP-1巨噬細(xì)胞24h

2、；c、LPS組：10ng/ml LPS刺激THP-1巨噬細(xì)胞6h；d、LPS+lidocaine組：20ug/ml利多卡因預(yù)處理THP-1巨噬細(xì)胞24h，再予以10ng/ml LPS刺激THP-1巨噬細(xì)胞6h；e、阻斷劑組(LPS+lidocaine+M組)：利多卡因（20ug/ml）預(yù)處理THP-1細(xì)胞24h，再加入10ng/ml LPS刺激6h，最后加入10μmol/l MDL-12,330A(M)共同刺激30min。采用酶聯(lián)免疫吸

3、附試驗(yàn)法（ELISA）測(cè)定細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-18的表達(dá)，蛋白質(zhì)印跡法（western blot）檢測(cè)NLRP3炎性體相關(guān)蛋白NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：ELISA和Western Blot結(jié)果顯示：1）與LPS組相比， LPS+lidocaine組ELISA檢測(cè)上清液細(xì)胞因子IL-1β、IL-18表達(dá)明顯下降，細(xì)胞內(nèi)NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白表達(dá)顯著降低；與Contro

4、l組相比，Lidocaine組細(xì)胞上清液IL-1β、IL-18及細(xì)胞內(nèi)NLRP3、ASC和 Caspase-1蛋白表達(dá)無明顯差異；說明利多卡因?qū)Ψ茄装Y狀態(tài)的THP-1巨噬細(xì)胞無明顯作用，但可負(fù)性調(diào)控LPS誘導(dǎo)THP-1巨噬細(xì)胞 NLRP3炎性體的表達(dá)，抑制 IL-1β、IL-18的分泌。2）與LPS+lidocaine組相比，LPS+lidocaine+M組細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-18表達(dá)明顯增多，細(xì)胞內(nèi)NLRP3、ASC和Cas