補(bǔ)中益氣湯預(yù)防給藥對(duì)UC小鼠NLRP3炎性體調(diào)控研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分：補(bǔ)中益氣湯預(yù)防給藥對(duì)UC小鼠腸道變化的影響
　　目的：
　　UC是以腹痛、腹瀉、黏液血便為主要臨床表現(xiàn)的潰瘍性結(jié)腸炎疾病。建立小鼠UC模型，以補(bǔ)中益氣湯行預(yù)防性給藥，觀察小鼠全身癥狀的變化，結(jié)腸病理改變，評(píng)估補(bǔ)中益氣湯對(duì)急慢性UC小鼠的預(yù)防作用。
　　方法:
　　將240只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、柳氮磺砒啶(SASP)對(duì)照組，補(bǔ)中益氣

2、湯高劑量組，補(bǔ)中益氣湯中劑量組，補(bǔ)中益氣湯低劑量組，每組40只。除正常組外，其余各組予DSS造模7天?？瞻讓?duì)照組，模型對(duì)照組每日給予蒸餾水0.01mL/g灌胃;柳氮磺砒啶對(duì)照組每日給予柳氮磺砒啶1.33g/kg灌胃;補(bǔ)中益氣湯高、中、低劑量組每日分別給予補(bǔ)中益氣丸12g/kg、6g/kg、3g/kg灌胃，給藥周期14天，于1、2、3、4周4個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死部分小鼠（每組10只），提取結(jié)腸樣本，觀察小鼠結(jié)腸病理變化。
　　結(jié)果:

3、　　較空白組，各周模型組小鼠結(jié)腸縮短(P＜0.05)，結(jié)腸質(zhì)量增加(P＜0.05);較模型組，各周用藥組結(jié)腸縮短明顯緩解(P＜0.05)，結(jié)腸質(zhì)量無(wú)明顯差異。各周模型組小鼠病理見結(jié)腸上皮糜爛，出血，多病灶淺潰瘍，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn);給藥組均不同程度的改善上述癥狀。
　　第二部分：補(bǔ)中益氣湯預(yù)防給藥對(duì)UC小鼠結(jié)腸黏膜NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA的影響
　　目的：
　　NLRP3炎性體由NLRP3(NOD樣

4、受體3，NOD-like receptor protein3)、ASC（凋亡相關(guān)的斑點(diǎn)樣蛋白，apoptosis-associated speck-like protein containing CARD)、caspase-1（含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1）構(gòu)成。NLRP3是危險(xiǎn)信號(hào)的感受器，能被多種病原體激活，激活后的NLRP3可與ASC、caspase-1連接，形成NLRP3炎性體，從而進(jìn)一步使caspase-1活化，參與腸道免疫

5、反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察補(bǔ)中益氣湯對(duì)UC小鼠行預(yù)防干預(yù)后小鼠黏膜NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA的影響，并探討相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　造模、分組、給藥同前。處死小鼠，提取結(jié)腸樣本。采用實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time Quantitative polymerase chain reaction，qPCR)檢測(cè)小鼠結(jié)腸黏膜NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果

6、:
　　造模1、2周時(shí)，較空白組，模型組NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表達(dá)水平顯著升高(P＜0.05);較模型組，柳氮磺砒啶對(duì)照組NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表達(dá)水平顯著下降(P＜0.05);補(bǔ)中益氣湯高、中、低劑量組NLRP3的mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯差異，ASC、caspase-1的mRNA表達(dá)水平顯著下降(P＜0.05)。造模3、4周時(shí)，較空白對(duì)照組，模型對(duì)照組NLRP3、ASC、casp

7、ase-1的mRNA表達(dá)水平顯著升高(P＜0.05);較模型對(duì)照組，柳氮磺砒啶對(duì)照組、補(bǔ)中益氣湯高、中、低劑量組NLRP3的mRNA表達(dá)水平下降(P＜0.05)，ASC、caspase-1的mRNA表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05）。
　　第三部分：補(bǔ)中益氣湯預(yù)防給藥對(duì)UC小鼠結(jié)腸黏膜及血漿細(xì)胞因子IL-1β、IL-18、IL-33的作用
　　目的：
　　活化后的NLRP3炎性體可激活caspase-1，使其分泌加工IL

8、-1β、IL-18、IL-33等細(xì)胞因子。IL-1β、IL-18、IL-33是重要的炎癥介質(zhì)，在潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用。
　　方法:
　　造模、分組、給藥同前。提取小鼠血漿樣本及結(jié)腸黏膜樣本。采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)小鼠血漿及結(jié)腸黏膜中IL-1β、IL-18、IL-33的含量。
　　結(jié)果:
　　與空白對(duì)照組比較，各周模型對(duì)照組小鼠血漿、結(jié)腸黏膜中IL-1β、IL-18、IL-33的含量顯著升高(

9、P＜0.05);造模1周時(shí)，與模型組比較，柳氮磺砒啶對(duì)照組、補(bǔ)中益氣湯高、中、低劑量組小鼠血漿、結(jié)腸黏膜IL-1β、IL-18、IL-33的含量顯著降低(P＜0.05);造模2周時(shí)，與模型對(duì)照組比較，柳氮磺砒啶對(duì)照組、補(bǔ)中益氣湯高、中、低劑量組小鼠血漿、結(jié)腸黏膜IL-1β、IL-18含量顯著降低(P＜0.05)，IL-33的含量無(wú)明顯差異(P＞0.05);造模3、4周時(shí)，與模型對(duì)照組比較，柳氮磺砒啶對(duì)照組、補(bǔ)中益氣湯高、中、低劑量組小鼠

10、血漿、結(jié)腸黏膜IL-1β、IL-18、IL-33的含量無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:研究結(jié)果顯示，葡聚糖硫酸鈉可成功誘導(dǎo)小鼠急慢性潰瘍性結(jié)腸炎，模型對(duì)照組在潰瘍性結(jié)腸炎急性、慢性期均顯示出與人類潰瘍性結(jié)腸炎相似的癥狀，其炎癥的發(fā)展可能與小鼠結(jié)腸黏膜NLRP3炎性體被激活，小鼠結(jié)腸黏膜NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表達(dá)上調(diào)，以及其下游炎癥因子IL-1β、IL-18、IL-33的表達(dá)上調(diào)相關(guān)。本研究以柳氮磺