萆薢除痹湯經(jīng)PI3K-AKT-mTOR通路調(diào)控NLRP3炎性體干預(yù)尿酸性腎病的機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討尿酸性腎病的病因病機(jī)、辨證分型;探討萆薢除痹湯是否通過(guò)下調(diào)PI3K/AKT/mTOR通路，進(jìn)而降低NLRP3炎性體的表達(dá)，發(fā)揮干預(yù)尿酸性腎病的作用。
　　方法:理論方面通過(guò)查閱并分析相關(guān)文獻(xiàn)，探討尿酸性腎病的病因病機(jī)，及清熱利濕法對(duì)尿酸性腎病臨床療效的薈萃分析。實(shí)驗(yàn)方面分成三個(gè)部分，實(shí)驗(yàn)一，篩選最優(yōu)尿酸性腎病大鼠模型，從腎質(zhì)量、黃嘌呤氧化酶、血尿酸、肌酐、尿素氮、腎組織病理等多個(gè)方面，比較三種尿酸性腎病大鼠模型的不同，觀

2、察不同造模方法對(duì)尿酸性腎病大鼠的腎損害程度，進(jìn)而篩選更為合適的動(dòng)物模型，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)做鋪墊。實(shí)驗(yàn)二，將動(dòng)物分成6組（空白組，模型組，別嘌呤醇組，萆薢除痹湯高、中、低劑量組），利用腺嘌呤+乙胺丁醇ig造模。觀察大鼠一般情況，制作腎臟病理切片，并進(jìn)行腎組織病理評(píng)分，檢測(cè)大鼠血清尿酸、肌酐、尿素氮，運(yùn)用Western blot方法檢測(cè)NLRP3、caspase-1、ASC蛋白，ELISA方法檢測(cè)IL-1β，RT-PCR方法檢測(cè)NLRP3、cas

3、pase-1、ASC、IL-1β mRNA的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)三，大鼠巨噬細(xì)胞NR8383常規(guī)培養(yǎng)及傳代，運(yùn)用LPS刺激NR8383細(xì)胞，并用不同濃度萆薢除痹湯含藥血清進(jìn)行干預(yù)。ELISA方法檢細(xì)胞上清液IL-1β的含量，Western blot法檢測(cè)細(xì)胞p-PI3K，p-AKT，p-mTOR、NLRP3、caspase-1、ASC蛋白，RT-PCR方法檢測(cè)細(xì)胞中NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β mRNA的表達(dá)水平。
　

4、　結(jié)果:
　　1.理論研究結(jié)果
　　尿酸性腎病基本病機(jī)是濕熱之邪阻滯氣機(jī)，導(dǎo)致經(jīng)絡(luò)不通，Meta分析顯示運(yùn)用清熱利濕方藥治療本病，能夠有效降低尿酸性腎病患者血尿酸、肌酐、尿素氮、尿蛋白等指標(biāo)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，本病與PI3K/AKT/mTOR通路及下游NLRP3炎性體密切相關(guān)，通過(guò)調(diào)控此通路治療尿酸性腎病，可能是治療尿酸性腎病的重要機(jī)制。
　　2.實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果
　　2.1.最優(yōu)尿酸性腎病大鼠模型篩選:腺嘌呤+乙胺

5、丁醇方法能夠升高大鼠黃嘌呤氧化酶、血尿酸、肌酐、尿素氮的水平，并且腎組織出現(xiàn)大量尿酸結(jié)晶沉積，巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)最為明顯。
　　2.2.萆薢除痹湯降低大鼠腎組織NLRP3炎性體的研究:萆薢除痹湯能夠有效減少大鼠血清黃嘌呤氧化酶、尿酸、肌酐、尿素氮，降低腎組織活性氧的水平，病理結(jié)果提示:本方能夠有效減少尿酸鹽的沉積，減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，降低其病理評(píng)分，降低NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β蛋白和基因的表達(dá)。
　　2.3

6、.萆薢除痹湯在NR8383細(xì)胞通過(guò)PI3K/AKT/mTOR調(diào)控NLRP3作用機(jī)制研究:萆薢除痹湯能夠降低NR8383細(xì)胞中PI3K、AKT、mTOR磷酸化蛋白的表達(dá)，降低NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β蛋白和基因的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　理論方面，清熱利濕法是治療尿酸性腎病的重要方法，能夠有效降低血尿酸，并保護(hù)腎功能。NLRP3能夠在痛風(fēng)患者及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中高表達(dá)，并且與腎損傷密切相關(guān)，故可能與尿酸性腎病具有