基于代謝組學(xué)探討大黃靈仙膠囊防治膽結(jié)石的作用機(jī)制及應(yīng)用研究.pdf

1、目的：
　　觀察大黃靈仙膠囊對(duì)膽石病患者的干預(yù)療效及其膽汁代謝組學(xué)特征的改善，同時(shí)探討其防治C57BL/6小鼠膽結(jié)石模型的作用機(jī)制。
　　方法：
　?。?）臨床研究：將診斷明確為膽結(jié)石并慢性膽囊炎的142例患者按隨機(jī)、對(duì)照原則分為大黃靈仙膠囊治療組72例和消炎利膽片對(duì)照組70例。除其他正常用藥治療外，治療組給予口服大黃靈仙膠囊治療每日3次，每次6粒；對(duì)照組給予口服消炎利膽片每日3次，每次6粒，療程3個(gè)月。治療前后分別統(tǒng)

2、計(jì)兩組患者中醫(yī)癥候評(píng)分總積分、膽囊炎癥及膽結(jié)石的 B超改善情況、膽汁內(nèi)源性代謝物特征改變（GC-MS），及觀察治療結(jié)束后血液實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，隨訪評(píng)價(jià)其安全性及療效。
　?。?）基礎(chǔ)研究：將50只雄性C57BL/6小鼠按統(tǒng)計(jì)軟件隨機(jī)分為正常對(duì)照組（N組）、模型組（M組）、熊去氧膽酸對(duì)照組（U組）、正常藥物對(duì)照組（Y組）、大黃靈仙膠囊治療組（D組），每組10只，以下各組名稱均用簡(jiǎn)稱代替（N,M,U,Y,D）。除N與Y組給予正常飼料喂養(yǎng)外，

3、M、U、D組均給予高脂、高膽固醇（15％脂肪、1%膽固醇、0.5%膽酸）致石飼料喂養(yǎng)。根據(jù)小鼠與成人體重等效藥物劑量換算，造模期間U組給予130 mg/kg?d UDCA干粉溶液灌胃治療，Y組和 D組每天給予大黃靈仙膠囊湯藥灌胃，大黃靈仙膠囊灌胃劑量為13g/kg?d。N組和 M組則分別給予相同體積的生理鹽水灌胃。8周后采集小鼠血清做生化檢查、膽囊結(jié)石檢測(cè)其結(jié)石成分，取相同部位的肝組織，分別使用免疫組化、PCR、Western blot

4、ting技術(shù)檢測(cè)其肝膽管側(cè)模細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因及其蛋白表達(dá)差異。
　　結(jié)果：
　　（1）臨床研究：
　?、倥c對(duì)照組相比，治療組療效略高于對(duì)照組（P=0.04）；癥候積分的改善顯著高于對(duì)照組（P<0.001）；膽囊內(nèi)結(jié)石改善情況優(yōu)于對(duì)照組（P=0.03）；治療后對(duì)膽汁透聲差、壁毛糙情況的改善亦優(yōu)于對(duì)照組（P=0.04，P=0.03）；
　?、谥委熐昂髮?duì)照，兩組患者血液檢查指標(biāo)均有好轉(zhuǎn)，與對(duì)照組相比，治療組WBC、AL

5、T、AST、TBIL、DBIL、TBA的改善程度較大（均 P<0.05）；
　?、蹆山M患者治療前后膽汁內(nèi)源性代謝物除 LDL外其他代謝物均有顯著性改變（均P<0.001），且與對(duì)照組相比，治療組對(duì)丙氨酸、檸檬酸、乳酸、甘氨酸、膽固醇、甘油、蘋果酸、膽堿、牛黃堿代謝物濃度改變差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）；
　?、軆山M患者均未出現(xiàn)明顯嚴(yán)重的不良反應(yīng)和特殊事件
　　（2）基礎(chǔ)研究：
　?、貼、Y組未見(jiàn)膽結(jié)石，M

6、組小鼠成石率為100%，膽囊內(nèi)見(jiàn)顆粒樣或泥沙樣沉淀，U、D組成石率分別為44.44%、30%，兩組均低于M組（P<0.0125）；
　　②經(jīng)溴化鉀壓片法紅外光譜分析出小鼠膽結(jié)石為膽固醇結(jié)石；
　?、跴CR結(jié)果：與M組相比，N、Y、D組小鼠Abcb11和Abcc2均相對(duì)升高（均P<0.001）；與U組相比，D組小鼠Abcb11 mRNA表達(dá)較高（P<0.001），與D組相比，N組、U組Abcc2 mRNA表達(dá)均較高（均P=0.

7、002）；
　　④免疫組化結(jié)果：與M組相比，N、U、Y、D四組組小鼠Abcb11和Abcc2蛋白表達(dá)均升高（均 P<0.001），且其他四組互相比較均未見(jiàn)明顯差異；
　?、軼estern blotting結(jié)果：與M組相比，N、U、Y、D四組小鼠Abcb11和Abcc2蛋白表達(dá)均升高（均P<0.001）；與N組相比，D組Abcc2蛋白表達(dá)下降（P=0.002），與U組相比未見(jiàn)明顯差異。
　　結(jié)論：
　　大黃靈仙膠囊