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文檔簡介
1、目的:檢測未妊娠小鼠、正常妊娠模型小鼠及URSA模型小鼠脾臟CD4+Th17/Treg細(xì)胞活化水平及 IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23細(xì)胞因子分泌的變化。探討CD4+Th17/Treg細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子與URSA的關(guān)系,為URSA患者制定免疫防治策略提供基礎(chǔ)資料。
方法:建立URSA小鼠模型(♀CBA/J×♂DBA/2J),實(shí)驗(yàn)設(shè)未妊娠小鼠(♀CBA/J)和正常妊娠小鼠模型(♀CBA/J×♂Balb/c);用免
2、疫磁珠分選技術(shù)(MACS)將三組雌鼠脾臟中的CD4+T細(xì)胞分選出來,將分選的CD4+T細(xì)胞體外誘導(dǎo)活化為Th17/Treg兩個細(xì)胞體系,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測兩個細(xì)胞體系的誘導(dǎo)活化情況;通過Luminex xMAP技術(shù)檢測誘導(dǎo)活化后的細(xì)胞培養(yǎng)上清液及蛻膜、胎盤細(xì)胞研磨上清中IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23的分泌水平。用Western-Blot檢測Th17/Treg兩細(xì)胞體系及母-胎界面的蛻膜、胎盤細(xì)胞中IDO、FoxP
3、3蛋白的表達(dá)水平。
結(jié)果:(1)FCM檢測未妊娠小鼠、正常妊娠模型小鼠和URSA模型小鼠脾臟中CD4+T細(xì)胞來源的Th17細(xì)胞的誘導(dǎo)結(jié)果分別為(0.32±0.19)%、(0.13±0.06)%、(0.72±0.38)%。URSA組Th17細(xì)胞明顯高于未妊娠組和正常妊娠組。三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。三組CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞的誘導(dǎo)結(jié)果分別為(0.38±0.15)%、(0.85±0.48
4、)%、(0.17±0.12)%。URSA組CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞明顯低于未妊娠組和正常妊娠組。三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
?。?)Luminex xMAP技術(shù)檢測小鼠母-胎界面的蛻膜、胎盤細(xì)胞研磨上清中的細(xì)胞因子分泌水平:正常妊娠組IL-17A(9.90±5.04)pg/ml、IL-10(6.50±7.03)pg/ml、IL-23(14.84±11.41)pg/ml和URSA組IL-1
5、7A(14.00±16.73)pg/ml、IL-10(4.10±6.25) pg/ml、IL-23(17.52±16.15)pg/ml。而IL-21細(xì)胞因子分泌水平濃度低于檢測下限(P>0.05)。三組小鼠誘導(dǎo)后的Th17/Treg細(xì)胞上清中的IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23細(xì)胞因子分泌水平的濃度均低于檢測下限。
(3)Western Blot檢測未妊娠小鼠、正常妊娠模型小鼠和URSA模型小鼠脾臟來源的CD4+
6、T細(xì)胞誘導(dǎo)后的Th17/Treg細(xì)胞中IDO、FoxP3結(jié)果:URSA組IDO、FoxP3的表達(dá)均明顯低于未妊娠組和正常妊娠組。三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。URSA組小鼠研磨的蛻膜、胎盤細(xì)胞中IDO、FoxP3蛋白表達(dá)均顯著低于正常妊娠組。兩組之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:(1)URSA小鼠Th17細(xì)胞的活化分化增殖與URSA的發(fā)生相關(guān),即Th17細(xì)胞數(shù)量上升不利于妊娠維持;正常妊娠
7、表現(xiàn)為CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞偏移現(xiàn)象,在URSA時CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞數(shù)量降低則不足以維持妊娠。
?。?)URSA小鼠脾CD4+T細(xì)胞活化后分泌IL-17A和IL-23與URSA的發(fā)病有關(guān),且兩者的增加可能誘使URSA發(fā)生;IL-10分泌升高則可維持正常的妊娠。
?。?)URSA小鼠的蛻膜、胎盤細(xì)胞中IDO、FoxP3蛋白表達(dá)較正常妊娠組均顯著降低,監(jiān)測URSA患者再孕時早孕期的
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