難治性根尖周炎糞腸球菌臨床分離株的生物學特性及其抗菌方法的研究.pdf

1、難治性根尖周炎通常指使用常規(guī)的根管治療方法反復進行治療卻仍遷延不愈的根尖周炎，是臨床治療的難點與重點。在持續(xù)感染根管中通常存在著擁有頑強生命力的糞腸球菌（Enterococcus faecalis,E.f），它具有多種不同于其他細菌的獨特的生物學特性，目前由于存在實驗設(shè)計方法及病例數(shù)量等方面因素的限制，對于難治性根尖周炎病例中E.f的檢出、臨床分離株與標準株之間的生物學表型差異及關(guān)于臨床分離株的殺菌效果研究尚無足夠的證據(jù)。故本實驗的主要

2、目的是檢測E.f在難治性根尖周炎病例中的檢出率及其與臨床癥狀之間的相關(guān)性，分析E.f臨床分離株的表型差異及探討幾種抗菌方法對分離株的殺滅效果，主要分為以下三部分實驗：
　　1.臨床樣本中糞腸球菌的分離鑒定及表型測定
　　按照已設(shè)定的納入排除標準收集2014年12月至2015年3月之間因難治性根尖周炎（至少接受過2次正規(guī)根管治療后，出現(xiàn)癥狀者）在本科室進行根管再治療的病例信息，使用 Reciproc單支銼按照事先設(shè)定的步驟采集

3、根管內(nèi)的細菌樣本，實驗室分離培養(yǎng)，16srRNA測序鑒定。將E.f陽性樣本進行生物學特性的測定，分別使用結(jié)晶紫染色法結(jié)合紫外分光光度測定值來檢測生物膜形成能力、細菌計數(shù)法結(jié)合OD600值法測定細菌生長曲線及使用96孔板法測定各菌株的耐酸堿能力。最后將細菌的檢出率與臨床癥狀之間的關(guān)系進行統(tǒng)計分析，將各項生物學特性結(jié)果進行比對，分析臨床分離株與標準株之間的表型差異。
　　結(jié)果表明，本實驗共采集難治性根尖周炎患牙中的細菌樣本39例，經(jīng)分

4、離鑒定共得到E.f臨床分離株18例，其檢出率為46.15％。與此同時，在對16srRNA序列測定結(jié)果與基因組的比對中發(fā)現(xiàn)，各臨床分離株均與E.f V583的序列存在高相似度（≈99%）。E.f的檢出與疼痛、腫脹、竇道及無癥狀四組之間均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。E.f標準株V583與18株臨床分離株（S1-S18）均可以形成生物膜，且與標準株比較CV染色OD570值有顯著性差異（P＜0.05）的共7株，但在細菌生長曲線、耐酸堿能力方面

5、沒有顯著性差異（P＞0.05）。細菌生物膜形成能力與臨床癥狀之間沒有明顯相關(guān)性（P＞0.05）。
　　2.現(xiàn)有根管消毒方法對臨床分離株殺菌效果的研究
　　超聲沖洗作為目前臨床應用中被普遍認可的消毒方法，已納入規(guī)范的根管消毒步驟。而最新引進的激光技術(shù)以其良好的消毒效果也已被更多的臨床醫(yī)生及科研工作者認可。基于目前對激光和超聲激活技術(shù)用于根管消毒的作用比較的研究結(jié)果來看，在臨床應用中此兩種技術(shù)哪一個可以達到更好的根管消毒效果，其

6、結(jié)論大不一致。因此，我們擬通過系統(tǒng)評價的方法來解決這一臨床問題。
　　即便本領(lǐng)域?qū)嶒炑芯咳源嬖谝恍┎蛔?，但我們可以看出：LAI包括PIPS在內(nèi)的激光處理方式有著其獨特的優(yōu)點。因此，在本領(lǐng)域設(shè)計更加完善的高質(zhì)量文章供meta分析（定量分析）之前，我們暫且認為激光的作用效果略好于超聲處理組。隨后，在體外建立 E.f饑餓狀態(tài)的離體牙感染根管模型，使用系統(tǒng)評價得出的優(yōu)勢消毒方法與幾種根管消毒劑對E.f臨床分離株與標準株進行殺菌效果研究。在

7、使用Er:YAG激光配合NaOCl這一特定組合對E.f標準株ATCC29212及臨床分離株中生物膜形成能力最強的一株進行殺菌實驗中發(fā)現(xiàn)，無論在標準株還是分離株的感染根管中，Er:YAG激光組與 NaOCl陽性對照組在根管表面及各深度處殺菌效果均顯著優(yōu)于陰性對照組（P＜0.05）。兩組細菌的Er:YAG激光處理組殺菌效果均好于5.25% NaOCl組。另外，隨著深度增加，兩組細菌的細菌減少率有降低的趨勢，且在對同一深度處不同細菌的比較中發(fā)