S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶新型共價(jià)抑制劑的發(fā)現(xiàn).pdf

1、目的：以人體細(xì)胞普遍存在的多胺合成通路的關(guān)鍵酶S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶為研究對象，并以本課題組已建立的AdoMetDC-PEPC-MDH法為基礎(chǔ)，初步篩選出對人S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶有抑制力的小分子化合物，再通過高效液相色譜法對初篩有效果的小分子藥物進(jìn)行二輪篩選，同時(shí)驗(yàn)證小分子藥物與人S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶是否通過發(fā)生共價(jià)結(jié)合反應(yīng)而抑制其活性，以期驗(yàn)證本課題組以AdoMetDC為靶標(biāo)的抗腫瘤藥物高通量篩選方法，并且得到對人S-腺苷甲硫氨酸

2、脫羧酶有較好抑制效果的共價(jià)結(jié)合的小分子抑制劑。
　　方法：（1）在人S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶蛋白洗脫蛋白中添加腐胺（2）利用體外酶促反應(yīng)，運(yùn)用AdoMetDC-PEPC-MDH法，以AdoMetDC抑制劑MGBG為陽性藥，在340nm波長下檢測吸光值，初步篩選出對AdoMetDC有抑制活性的小分子藥物。（3）將初步篩選得來的小分子藥物以及陽性對照藥MGBG通過HPLC方法進(jìn)行二輪篩選，檢測底物S-腺苷甲硫氨酸的剩余量來確定各小分子藥

3、物對S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶蛋白是否有抑制能力，并比較出各小分子藥物的抑制力強(qiáng)弱。（4）運(yùn)用質(zhì)譜法、不同時(shí)間孵育法和稀釋法對AdoMetDC及小分子抑制劑的結(jié)合方式進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：（1）優(yōu)化條件得到了高活性的人S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶蛋白。（2）人S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶與PEPC-MDH法相耦聯(lián)的酶促反應(yīng)實(shí)驗(yàn)初步篩選出了27，28，2930，36，37，47，52，53號可能有抑制效果的小分子。（3）利用HPLC法篩選，得到47

4、，52，53號藥物對人S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶蛋白活性具有抑制效果，且47號藥物的抑制效果較顯著。（4）對47，52，53號小分子藥物與人S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶蛋白的結(jié)合方式進(jìn)行探究，47，52，53號藥物表現(xiàn)出了很好的共價(jià)抑制趨勢。
　　結(jié)論：本研究利用本課題組建立的一種非放射性的人S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶活性檢測方法，以及后續(xù)的HPLC及質(zhì)譜法檢測方法成功篩選出了有一定抑制作用且與S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶蛋白共價(jià)結(jié)合的小分子抑制劑。