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1、對甘蔗干旱應(yīng)答相關(guān)基因S-腺苷蛋氨酸脫羧酶基因(ScSAMDC)進(jìn)行克隆、表達(dá)分析,有利于進(jìn)一步闡明甘蔗抗旱的分子機(jī)制,為甘蔗抗旱遺傳改良提供參考依據(jù),同時也為其他作物抗旱遺傳改良提供候選基因。
(1)同源克隆分別獲得ScSAMDC1、ScSAMDC2和ScSAMDC3基因的mORF序列。ScSAMDC1基因mORF長1188 bp,編碼395個氨基酸,預(yù)測蛋白質(zhì)分子量為42.78 kD。ScSAMDC2基因mORF長1200
2、 bp,編碼399個氨基酸,預(yù)測蛋白質(zhì)分子量為43.53kD。ScSAMDC3基因mORF長1188bp,編碼395個氨基酸,預(yù)測蛋白質(zhì)分子量為42.96kD。
(2)氨基酸序列預(yù)測分析結(jié)果表明,三個酶原均為親水性蛋白,且蛋白結(jié)構(gòu)具有不穩(wěn)定性。同時,三個酶原均含有兩個高度保守的功能結(jié)構(gòu)域(PEST結(jié)構(gòu)域和酶原剪切位點(diǎn))。
(3)氨基酸序列進(jìn)化樹分析結(jié)果表明,由ScSAMDC基因推導(dǎo)的氨基酸序列處于單子葉植物分支,與其
3、它禾本科植物玉米、小米、高粱、斑矛、小麥親緣關(guān)系更為接近。同時,三種甘蔗SAMDC并未聚于同一小分支。
(4)實(shí)時熒光定量PCR分析結(jié)果表明,ScSAMDC2和ScSAMDC3的表達(dá)均受PEG的強(qiáng)烈誘導(dǎo),且ScSAMDC2受PEG誘導(dǎo)效果強(qiáng)于ScSAMDC3。推測ScSAMDC基因可能在甘蔗抗干旱的分子機(jī)制中發(fā)揮多胺調(diào)節(jié)作用,且ScSAMDC基因家族的不同成員在對多胺調(diào)節(jié)作用中可能發(fā)揮的效果有所不同。
(5)成功構(gòu)建
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