CLOCK基因參與甲狀腺癌發(fā)生及進展的生物學功能及分子機制研究.pdf

1、研究背景：甲狀腺癌是內分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，已成為國際上發(fā)病率增長最快的實體瘤。臨床上用于甲狀腺癌早期篩查的指標極為匱乏，亟待尋找新的分子標志物。大量研究發(fā)現(xiàn)生物節(jié)律基因在大腸癌、乳腺癌等腫瘤的發(fā)生及進展中發(fā)揮著重要作用。其中CLOCK、BMAL1、NPAS2三種生物節(jié)律基因的蛋白產物組成正性調控元件,驅動生物節(jié)律的產生,并通過調控下游c-Myc、P53、P21等大量鐘控基因參與腫瘤細胞增殖、侵襲、轉移等重要功能，但生物節(jié)律基因

2、在甲狀腺癌領域的研究較少。課題組前期通過免疫組化預實驗，發(fā)現(xiàn)甲狀腺乳頭狀癌組織中CLOCK基因表達升高。這些提示我們CLOCK基因在甲狀腺癌的發(fā)生及進展中可能發(fā)揮重要作用，但其生物學作用及分子機制尚不清楚。
　　目的：利用CLOCK基因siRNA干涉片段，下調甲狀腺癌細胞中CLOCK基因表達水平，分析干涉后甲狀腺癌細胞的生物學功能變化。并檢測P21、P53、CyclinD1等鐘控基因的表達變化，初步探討CLOCK基因參與甲狀腺癌發(fā)

3、生及進展的分子作用機制。
　　方法：常規(guī)培養(yǎng)甲狀腺癌細胞株BCPAP，常規(guī)培養(yǎng)。根據(jù)CLOCK基因設計特異性的siRNA，利用Lipofecter2000試劑轉染BCPAP細胞，將甲狀腺癌細胞株分為空白對照組（KD組），轉染試劑對照組（ZD組），單純siRNA對照組（SD），陰性對照組（YD組）和干涉組（GS組）5組。給予不同處理，利用Western Blot檢測干涉效率，CCK8實驗檢測細胞增殖能力，粘附實驗檢測細胞粘附能力，流

4、式細胞儀檢測細胞凋亡程度，Transwell侵襲實驗評估侵襲與轉移能力。并通過Western Blot檢測P21、P53、CyclinD1等分子在干涉CLOCK基因后的表達變化。
　　結果：
　　1.干涉組（GS組）BCPAP細胞增殖能力較空白對照組（GD組）降低（P<0.05）。ZD組、SD組、YD組與GD組比無明顯改變（P>0.05）。
　　2.干涉組（GS組）BCPAP細胞凋亡較空白對照組（GD組）增多（P<0.

5、05）。ZD組、SD組、YD組與GD組比無明顯改變（P>0.05）。
　　3.干涉組（GS組）BCPAP細胞粘附能力較空白對照組（GD組）減低（P<0.05）。ZD組、SD組、YD組與GD組比無明顯改變（P>0.05）。
　　4.干涉組（GS組）BCPAP遷移及侵襲細胞數(shù)較空白對照組（GD組）減少（P<0.05）。ZD組、SD組、YD組與GD組比無明顯改變（P>0.05）。
　　5.P21、P53蛋白在干涉組（GS組）