人肺腺癌放射抗拒細(xì)胞株H1299R的建立及miR-183調(diào)控HIF-1α影響H1299R放射敏感性的初步研究.pdf

1、目的：在乏氧微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞可通過(guò)缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）高表達(dá)來(lái)維持其氧和代謝的穩(wěn)定，促進(jìn)自身生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，從而產(chǎn)生放療抵抗導(dǎo)致治療失敗。有報(bào)道發(fā)現(xiàn) miR-183可調(diào)控 HIF-1α，但它們與放射敏感性之間的關(guān)系尚未闡明。本研究將在建立人肺腺癌細(xì)胞放射抗拒模型的基礎(chǔ)上，通過(guò)干預(yù)miRNA-183的表達(dá)，觀察細(xì)胞放射敏感性的變化，初步探討miR-183與HIF-1α在放療抵抗中的關(guān)系。
　　方法：分別通過(guò)常規(guī)分割法與亞

2、致死劑量法誘導(dǎo)出人肺腺癌H1299放射抗拒細(xì)胞，克隆形成實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證放射抗拒性，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期與凋亡；慢病毒轉(zhuǎn)染H1299放射抗拒細(xì)胞，RT-PCR分別檢測(cè)miR-183、HIF-1αmRNA表達(dá)，CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。
　　結(jié)果：常規(guī)分割法（2 Gy）照射15次后的H1299R-2 Gy細(xì)胞SF2、D0等放射敏感性參數(shù)較親本細(xì)胞倍數(shù)最多，細(xì)胞存活肩區(qū)最寬，放射抗拒性最強(qiáng)，命名為H1299R細(xì)胞；CCK-8實(shí)驗(yàn)及流式

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，H1299R細(xì)胞與親本H1299細(xì)胞相比具有顯著的放射抗拒性（P<0.05）；RT-PCR檢測(cè)H1299R細(xì)胞中miR-183與HIF-1αmRNA水平相對(duì) H1299細(xì)胞均呈高表達(dá)（P<0.05）；將下調(diào) miR-183的慢病毒轉(zhuǎn)染 H1299R細(xì)胞后，HIF-1αmRNA的水平也相對(duì)呈低表達(dá)（P<0.05），增殖曲線表明下調(diào)miR-183后H1299R細(xì)胞對(duì)X射線的敏感性與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異（P>0.05）。