模型生物膜體系的構建及其基于磷脂酶A2的水解研究.pdf

1、本實驗通過構建模型生物膜體系，并利用和頻振動光譜(SFG)、共聚焦熒光顯微鏡(LSCM)衰減全反射紅外光譜(ATR-FTIR)等多種表征手段，在形態(tài)學、反應動力學和分子結構等方面全面探究磷脂酶A2與生物膜的作用，從現(xiàn)象到分子層面對磷脂酶A2的水解作用提供一個深入、一致的系統(tǒng)性解釋，為磷脂酶的生物學研究提供一個較為完整的模型。
　　本文通過三種光學技術——和頻振動光譜(SFG)、共聚焦熒光顯微鏡(LSCM)和衰減全反射紅外光譜(AT

2、R-FTIR)，研究了平面磷脂雙分子層在鈣離子依賴性蜂毒磷脂酶A2(bvPLA2)作用下的水解過程。研究采用熒光共定位的方法，通過LSCM觀測，追蹤水解的動態(tài)過程和形態(tài)學變化，半定量以及定性地闡釋了水解產物的空間分布情況。結果表明，水解產物之一的脂肪酸大部分從界面上脫離并游離到溶液介質當中，而另一個水解產物溶血磷脂則在界面上形成了穩(wěn)定的自組裝微管結構。ATR-FTIR實驗的觀測結果同樣佐證了這一動態(tài)過程。SFG實驗明確地揭示了鈣離子在水

3、解過程中發(fā)揮的作用，即通過連接磷脂膜和吸附在其表面的磷脂酶，誘導磷脂酶分子取向發(fā)生變化，從而有效激發(fā)界面上磷脂的水解反應。本研究以界面磷脂水解反應為例，建立了一個基于現(xiàn)代光學技術、能夠在分子和微觀層面上表征界面信息的實驗體系，對于探究和理解磷脂水解的這一重要的生物物理化學過程有很大的幫助。
　　此外，為了優(yōu)化和擴展實驗體系，本文在其他熒光標記手段上和多種模型雙層膜制備上有所嘗試，制備出可用于熒光標記且不易淬滅的新型硅量子點，并制備