2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、腫瘤的惡性進展與巨噬細胞極化微環(huán)境密切相關(guān)。在腫瘤的形成中,極化的M2型巨噬細胞創(chuàng)造了一種炎性環(huán)境促進腫瘤生長。然而,巨噬細胞極化微環(huán)境與腫瘤進展是否有直接關(guān)系,至今尚無定論。因此,明確巨噬細胞極化微環(huán)境促進腫瘤發(fā)展的機制對腫瘤治療甚為關(guān)鍵。本課題以肺癌為研究對象,目的是研究巨噬細胞極化微環(huán)境對肺癌的促進及藥物治療,以期為肺癌防治提供有效措施。
  本研究首先考察體外巨噬細胞極化微環(huán)境對LLC細胞是否有直接影響,采用小鼠腹腔巨噬細

2、胞(PEMs),用LPS(10 ng/ml)將PEMs極化為M1型巨噬細胞;用IL-4(10 ng/ml)誘導(dǎo)PEMs為M2型巨噬細胞;通過熒光雙染法檢測極化的巨噬細胞與LLC細胞共培養(yǎng);MTT法和PCNA免疫熒光法檢測巨噬細胞條件培養(yǎng)基對LLC細胞增殖影響;細胞劃痕實驗、Transwell實驗分析巨噬細胞條件培養(yǎng)基對LLC細胞遷移、侵襲的關(guān)系。此外,本課題還研究了體外巨噬細胞極化微環(huán)境對新生血管生成的影響,MTT法和PCNA免疫熒光法

3、檢測巨噬細胞條件培養(yǎng)基對人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)的促增殖作用;伊文斯蘭滲出法檢測HUVEC細胞體外通透性;雞胚尿囊膜(CAM)模型研究巨噬細胞條件培養(yǎng)基對新生血管形成的影響。接著,為探索巨噬細胞極化微環(huán)境促癌機制,我們用AO/EB熒光雙染法檢測細胞凋亡;免疫熒光法檢測自噬相關(guān)蛋白LC3-B、P62表達;DQ-Green BSA降解實驗觀察細胞溶酶體活性;DAF-2 DA和DCF-DA分別檢測細胞內(nèi)NO和ROS。最后,我們建立烏拉坦

4、誘導(dǎo)的小鼠肺癌模型,流式細胞術(shù)和Western Blot檢測肺癌小鼠肺泡細胞中巨噬細胞表型;ELISA試劑盒檢測肺癌小鼠血清中5-HIAA和肺泡灌洗液中IFN-γ、IL-12、TNF-α、TGF-β、IL-10、IL-4含量;免疫組化法檢測小鼠肺組織中LC3-B、P62和CD31蛋白的表達;伊文斯蘭滲出法檢測肺血管通透性。另外,為充分證明巨噬細胞極化微環(huán)境促進肺癌發(fā)生的機制,我們使用巨噬細胞耗竭劑、自噬抑制劑和血管保護劑治療肺癌小鼠,觀

5、察其對肺癌發(fā)生的阻止作用。
  本研究表明,M1型巨噬細胞對LLC細胞吞噬能力明顯比極化前強,而M2型巨噬細胞對LLC細胞吞噬能力明顯比極化前弱。極化的M1型和M2型巨噬細胞條件培養(yǎng)基對LLC細胞增殖、遷移、侵襲無明顯影響,然而,我們意外的發(fā)現(xiàn)M2型巨噬細胞條件化培養(yǎng)基能促進體外HUVEC的增殖、增加HUVEC細胞體外通透性、誘導(dǎo)雞胚尿囊膜(CAM)新生血管形成,而M1型巨噬細胞條件化培養(yǎng)基對此沒有影響。機制研究顯示,1%血清饑餓

6、條件下,M2型巨噬細胞條件培養(yǎng)基明顯增加HUVEC細胞自噬小體及LC3-B蛋白表達,但減少自噬底物P62蛋白和DQ-Green BSA的降解,而自噬抑制劑氯喹在不影響HUVEC細胞增殖濃度下降低HUVEC通透性。此外,我們也發(fā)現(xiàn),M2型巨噬細胞條件化培養(yǎng)基可以增加HUVEC細胞內(nèi)NO和ROS水平,使用氯喹抑制自噬后可降低細胞內(nèi)NO和ROS水平。最后,我們在體內(nèi)實驗中觀察到烏拉坦誘導(dǎo)的小鼠肺癌增加肺泡M2型巨噬細胞比例,促進肺組織LC3-

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