睪酮調(diào)節(jié)巨噬細胞極化介導(dǎo)脂肪細胞分化與小鼠附睪脂肪積累.pdf

1、隨著社會的進步與生活條件的改善，肥胖已經(jīng)成為全球化健康問題。已有研究證明，睪酮作為體內(nèi)重要的雄性激素廣泛參與多種生物學(xué)過程，男性血清睪酮水平與脂代謝密切相關(guān)，血清睪酮偏低是導(dǎo)致男性肥胖的一大誘因。巨噬細胞是機體內(nèi)重要的免疫細胞，它可在局部微環(huán)境的誘導(dǎo)下活化形成具有不同表型和功能的亞細胞型，這被稱為巨噬細胞極化。經(jīng)典的M1型極化以高表達促炎因子為特征，而M2型極化與過敏、免疫調(diào)節(jié)等作用相關(guān)，M2型極化分為3種亞型，本文主要以典型的M2a型

2、極化為研究對象。已有研究證明，脂肪組織中的巨噬細胞極化表型的平衡與肥胖有著緊密的聯(lián)系，但其中機制尚不明確。因此，本課題旨在探究睪酮與脂肪細胞分化和巨噬細胞極化之間的關(guān)聯(lián)，為雄性激素與肥胖的研究提供理論基礎(chǔ)。
　　本課題首先在體外以小鼠3T3-L1前脂肪細胞為研究對象，在誘導(dǎo)分化過程中給予不同濃度的睪酮(0-10-5 mol/L)處理或含有睪酮(10-7 mol/L)的誘導(dǎo)后M1/M2極化條件培養(yǎng)基處理，通過油紅O染色、RT-qPC

3、R檢測脂肪細胞標志基因脂聯(lián)素，瘦素，Cebpβ，Pparα，Il6, Tnfα表達水平以測定前脂細胞的分化程度。以小鼠RAW264.7巨噬細胞為研究對象，以LPS(1μg/mL)或IL-4(20 ng/mL)誘導(dǎo)其分別向M1與M2a方向極化，同時給予不同濃度的睪酮刺激，通過RT-qPCR檢測M1型極化標志基因Nos2, Tnfα, Il6, Il1β與M2a型極化標志基因Arg1，Il10, Mgl2, Mrc1的mRNA相對表達水平，

4、從而檢測睪酮對巨噬細胞極化的作用。通過Western blot方法檢測Akt蛋白S473位點磷酸化水平，從而探究睪酮在巨噬細胞內(nèi)活化的信號通路。
　　本研究發(fā)現(xiàn)，睪酮并不直接影響3T3-L1前脂肪細胞分化，而是可通過誘導(dǎo)極化后的M1型巨噬細胞條件培養(yǎng)基顯著抑制前脂細胞分化，而含有或不含有睪酮的M2a極化條件培養(yǎng)基對3T3-L1細胞分化的影響并不顯著。RAW264.7細胞處理結(jié)果顯示，睪酮并不直接引起RAW264.7巨噬細胞極化，但

5、是睪酮可抑制LPS誘導(dǎo)的M1極化和促進IL-4誘導(dǎo)的M2a極化，并呈濃度依賴性。通過使用雄激素拮抗劑(HF)、雄激素受體抑制劑(ASC-J9)、Gαi蛋白抑制劑(PTX)、Akt1/2-siRNA進行細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究，結(jié)果表明，睪酮對巨噬細胞極化的調(diào)節(jié)作用是通過Gαi蛋白和Akt蛋白的磷酸化產(chǎn)生的，而不是通過經(jīng)典的雄激素受體通路。
　　在體內(nèi)，本課題通過外源注射黃體生成素受體(LHR)多肽降低小鼠血清睪酮水平。結(jié)果顯示，低血清睪

6、酮小鼠附睪白色脂肪組織增大。石蠟切片結(jié)果顯示，LHR多肽組脂肪細胞較對照組相比顯著增大。免疫組化結(jié)果顯示，肥胖的脂肪組織中有較多的M1型巨噬細胞，而其他對照組的脂肪組織中則是以M2a型巨噬細胞為主，且數(shù)量較少。而注射睪酮增補劑丙酸睪酮注射液(TPI)能逆轉(zhuǎn)這一結(jié)果。
　　本研究首次在體外證明了睪酮對巨噬細胞極化有顯著的調(diào)節(jié)作用。這種作用主要是通過Gαi蛋白與Akt蛋白通路產(chǎn)生，而不是經(jīng)典的雄激素受體。睪酮對脂肪細胞分化的影響是通過