調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在肥胖早期階段中的變化及其對內(nèi)臟脂肪巨噬細(xì)胞亞型的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：探討調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells，Treg)在肥胖早期階段的變化及其對內(nèi)臟脂肪巨噬細(xì)胞亞型的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：將4周齡的C57BL/6雄性小鼠，喂以含60％脂肪的高脂飲食造成早期肥胖模型。每周檢測小鼠的體重和血糖。分別在小鼠4周齡、10周齡和20周齡時(shí)處死小鼠，取血及附睪旁脂肪、脾臟和肝臟待用。用ELISA檢測小鼠血清中瘦素、胰島素水平;肝臟油紅O染色觀察小鼠肝臟脂肪浸潤程度;流式計(jì)數(shù)方法檢測脾臟內(nèi)

2、Treg細(xì)胞、脂肪組織內(nèi)經(jīng)典誘導(dǎo)型巨噬細(xì)胞(M1型)和條件活化型巨噬細(xì)胞(M2型)巨噬細(xì)胞的數(shù)量;用realtime-PCR的方法測量脂肪組織內(nèi)單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）的水平。同時(shí)，將高脂喂養(yǎng)的肥胖小鼠隨機(jī)分為雷帕霉素處理組和對照組，觀察雷帕霉素刺激Treg后對小鼠體重、附睪旁脂肪重量、血糖、血清胰島素和瘦素水平、脂肪組織內(nèi)巨噬細(xì)胞亞型的影響。
　　結(jié)

3、果：①C57BL/6小鼠在20周齡時(shí)成功建成早期肥胖模型。與正常飲食組小鼠相比，高脂喂養(yǎng)20周齡小鼠的體重(39.05 g±2.33 gvs31.65 g±1.20 g，P＜0.05)，附睪旁脂肪重量(2.12 g±0.48 g vs0.36g±0.09 g，P＜0.05)，血清瘦素水平（13.57 ng/ml±3.44 ng/ml vs4.52 ng/ml±0.60 ng/ml，P＜0.05）明顯增加，油紅O染色顯示高脂喂養(yǎng)組肝臟脂肪

4、浸潤明顯;但兩組間小鼠的胰島素水平(1.65 ng/ml vs1.39 ng/ml,P＞0.05)和血糖（8.8 mmol/L vs9.3 mmol/L,P＞0.05)無顯著性差異;提示該小鼠處于早期肥胖階段，在內(nèi)臟脂肪重量增加的同時(shí)未發(fā)生胰島素抵抗和糖尿病。②與正常飲食相比，高脂喂養(yǎng)組小鼠附睪旁脂肪組織內(nèi)的巨噬細(xì)胞數(shù)量增加，從4周齡、10周齡和20周齡小鼠的巨噬細(xì)胞比例逐漸增加，分別為的2.36％、8.36％和21.15％;4周齡、1

5、0周齡和20周齡小鼠的M1/M2巨噬細(xì)胞比例亦有增加趨勢，分別為0.28、1.80和1.37;同時(shí)伴有附睪旁脂肪MCP-1的表達(dá)增加，從4周齡的0.69、10周齡的1.70到20周齡的10.96。③高脂飲食組小鼠的脾臟Treg比例呈下降趨勢，在4周齡、10周齡和20周齡分別為6.40％±0.28％、4.93％±0.71％、4.73％±3.66％。④雷帕霉素干預(yù)小鼠相對于對照小鼠可使脾臟內(nèi)Treg細(xì)胞數(shù)量顯著性增加，從3.22％增加至15

6、.30％。與對照組相比，雷帕霉素增加脾臟內(nèi)Treg數(shù)量后，干預(yù)組的體重(27.08 g±0.79 g vs38.00 g±4.74 g，P＜0.05)，附睪旁脂肪重量(0.96 g±0.09 g vs2.05 g±0.52 g，P＜0.05)，血清瘦素水平(2.14 ng/ml±0.86 ng/ml vs13.90 ng/ml±2.56 ng/ml, P＜0.05)，血糖(8.15mmol/L±0.91 mmol/L vs12.15mm