組蛋白甲基轉移酶SETDB1在乳腺癌中的表達及功能學研究.pdf

1、目的：本實驗旨在研究SETDB1在乳腺癌組織及細胞株中的表達情況，探討其與乳腺癌發(fā)生發(fā)展及生存預后的關系；若其在乳腺癌中特異性表達，再通過上調和下調SETDB1在乳腺細胞株中的表達，研究其對靶細胞功能學方面的影響。
　　方法：采用RT-PCR和IHC方法檢測SETDB1在38對乳腺癌及癌旁組織中mRNA和蛋白水平的表達；采用IHC組織芯片方法檢測150例乳腺癌組織中蛋白表達水平并分析預后情況；采用RT-PCR和WB方法檢測SETD

2、B1在14種乳腺細胞株（MCF-7、ZR75-1、T47D、ZR75-30、BT549、SK-BR3、HCC1937、Bcap37、Hs578T、MDA-MB-453、MDA-MB-468、MDA-MB-231、BT474及HBL100，其中HBL-100為乳腺上皮細胞株，余均為乳腺癌細胞株）中的表達情況；利用慢病毒包裝和RNAi轉染技術在乳腺靶細胞株上高表達和沉默SETDB1，并通過RT-PCR和 WB方法驗證干擾后SETDB1在mR

3、NA和蛋白水平的表達；篩選出的高表達和沉默的乳腺克隆細胞株，應用CCK-8實驗、克隆形成實驗檢測其生長增殖能力，Transwell實驗檢測其遷移和侵襲能力，微球體實驗檢測其干細胞形成能力，流式細胞術實驗檢測其細胞周期和細胞凋亡能力；所有統(tǒng)計數據分析應用GraphPad Prism5.0和SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計，檢驗水準為P<0.05。
　　結果：
　　1.SETDB1在乳腺癌旁及癌組織和細胞株中的表達情況IHC結果顯示

4、，38例樣本中有23例（60.53％）癌組織，13例（34.21%）癌旁組織SETDB1陽性表達（P<0.05）；RT-PCR檢測結果顯示，38例乳腺癌與癌旁組織的相對表達量分別為（1.20±0.08、0.96±0.05)（t=2.44，P<0.05）。
　　2.SETDB1150例乳腺癌組織芯片結果中有92例（61.33%）陽性表達，56例（37.33%）陰性表達，SETDB1的蛋白表達與ER及Ki67的表達具有相關性（P=0.

5、001，P=0.035）；SETDB1的表達可作為乳腺癌獨立的預后指標（COX回歸，HR=2.633，95%CI=1.189-5.829，P=0.017）。
　　3.以正常乳腺上皮細胞株HBL-100作對照，RT-PCR檢測結果顯示，13株乳腺癌細胞株中MCF-7、T47D的表達水平最高（7.86±0.42、6.43±0.12）（P<0.05）；WB結果顯示，MCF-7、T47D的相對表達水平較高（2.24±0.08、1.95±0

6、.10）（P<0.05）。
　　4.以靶細胞的GFP株對照，RT-PCR及WB檢測結果均顯示，HBL-100的克隆細胞株A1659和Z2656表達水平明顯增高（19.28±0.73、22.10±1.23）、（2.38±0.05、6.31±0.38）（P<0.05）；MCF-7克隆細胞株sh2和sh4的表達水平明顯降低（0.15±0.02、0.39±0.05）、（0.66±0.02、0.36±0.03）（P<0.05）；T47D的克

7、隆細胞株sh2和sh4的表達水平亦明顯降低（0.20±0.01、0.34±0.02）、（0.79±0.04、0.22±0.03）（P<0.05）。
　　5.高表達SETDB1的細胞株HBL-100的克隆細胞株A1659和Z2656對數生長期細胞增殖數量明顯增高，平板克隆形成及軟瓊脂克隆形成數目增多，細胞周期S+G2/M期增高，細胞的遷移、侵襲和抗凋亡能力增強。
　　6.沉默SETDB1的細胞株MCF7和T47D的克隆細胞株s

8、h2和sh4對數生長期細胞增殖數量減少，平板克隆形成及軟瓊脂克隆形成數目減少，細胞周期出現G0/G1期和/或G2/M期阻滯，細胞的遷移、侵襲能力減弱。
　　結論：
　　1.SETDB1在乳腺癌組織及細胞株中高表達，可能在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中扮演癌基因角色并影響患者的預后生存情況，有望作為診斷和治療乳腺癌的一項獨立指標。
　　2.SETDB1可能是腫瘤惡化和復發(fā)的危險因素，所以SETDBl有望成為乳腺癌診斷，治療及預后的分子