組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶Ezh1促進TLR觸發(fā)天然免疫應(yīng)答及其機制研究.pdf

1、組蛋白的甲基化在調(diào)節(jié)基因表達(dá)方面發(fā)揮著重要的作用，而組蛋白甲基化修飾的研究在免疫學(xué)領(lǐng)域的研究才剛剛開始。為了尋找在天然免疫中可能發(fā)揮作用的表觀遺傳修飾酶，我們通過對小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進行分析，發(fā)現(xiàn)Ezh1在成熟的樹突狀細(xì)胞中有特異性的表達(dá)，于是我們認(rèn)為Ezh1可能在樹突狀細(xì)胞功能的調(diào)控中發(fā)揮作用。
　　本研究使用siRNA干擾了小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞中Ezh1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在Ezh1干擾后的細(xì)胞在使用LPS和PG

2、N刺激后所分泌的炎性因子如白細(xì)胞介素-6，腫瘤壞死因子和一型干擾素的水平有了顯著的降低。同樣我們使用siRNA干擾小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞后，其在LPS和PGN刺激后分泌的細(xì)胞因子水平也有所降低。Ezh1干擾后的樹突狀細(xì)胞在LPS刺激后的MHCII和共刺激分子的表達(dá)有所降低，導(dǎo)致其無法有效地誘導(dǎo)T細(xì)胞的應(yīng)答。在接下來的實驗中，我們需要驗證是否Ezh1對天然免疫的調(diào)控依賴于其及甲基化轉(zhuǎn)移酶的活性，我們通過在巨噬細(xì)胞中過表達(dá)酶活性區(qū)域缺失的Ezh

3、1的實驗進一步證明了Ezh1對TLR活化的調(diào)控是和其組蛋白賴氨酸甲基化轉(zhuǎn)移酶活性相關(guān)的。隨后通過分析信號通路的活化水平，我們發(fā)現(xiàn)在LPS刺激下，Ezh1干擾的巨噬細(xì)胞中TLR活化所誘導(dǎo)的信號通路的活化有所下降，NF-κb和IRF-3信號通路的中信號接頭分子和轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化有所下降。這種下降可通過過表達(dá)全長的Ezh1逆轉(zhuǎn)，但過表達(dá)酶活性缺失的Ezh1則沒有效果。Ezh1是一個組蛋白賴氨酸甲基化轉(zhuǎn)移酶，根據(jù)以前的報道其可通過對基因位點H3

4、K27三甲基化的修飾抑制蛋白的表達(dá)，我們猜想Ezh1可能通過沉默某些TLR通路的負(fù)調(diào)控分子基因的表達(dá)，維持其信號通路的暢通。通過對干擾Ezh1后的巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析和驗證，我們發(fā)現(xiàn)，Ezh1抑制TLR通路的負(fù)向調(diào)控蛋白Tollip的表達(dá)，而這種抑制依賴于Ezh1分子的甲基轉(zhuǎn)移酶活性。最后，我們通過染色體免疫共沉淀實驗證明了Tollip轉(zhuǎn)錄起始位點近端的H3K27三甲基化水平受到Ezh1的調(diào)控，并且Ezh1靶向與染色體的調(diào)節(jié)位點結(jié)