Wnt通路調(diào)控因子Pygo2在肝癌發(fā)病機(jī)制中作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　1.研究Wnt信號通路調(diào)控因子Pygo2在肝癌、癌旁組織及肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平，評價(jià)Pygo2在肝癌中的預(yù)后價(jià)值；
　　2.研究下調(diào) Pygo2表達(dá)對肝癌細(xì)胞生長、增殖等細(xì)胞生物學(xué)的影響，初步探索Pygo2通過影響Wnt/β-catenin信號通路靶基因表達(dá)參與肝癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。
　　3.研究炎癥因子IL-22與Pygo2的相關(guān)性及在診斷肝癌復(fù)發(fā)中的應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：
　　1.利用Rea

2、l-time PCR、免疫組化檢測肝癌、癌旁組織中Pygo2的表達(dá)情況，利用Western blot檢測5種不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞系中Pygo2的表達(dá)情況，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析Pygo2的不同表達(dá)水平與原發(fā)性肝癌患者預(yù)后的相關(guān)性；
　　2.利用shRNA技術(shù)建立Pygo2表達(dá)下調(diào)的肝癌細(xì)胞系SK-Hep1、Hep3B，分別采用CCK-8法細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、裸鼠體外荷瘤實(shí)驗(yàn)、免疫組化、Real-time PCR、雙熒光

3、素酶報(bào)告基因的方法研究 Pygo2表達(dá)下調(diào)對肝癌細(xì)胞生長、增殖等細(xì)胞生物學(xué)特性的影響并初步探索Pygo2通過影響Wnt/β-catenin信號通路靶基因表達(dá)參與肝癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1.從轉(zhuǎn)錄水平、蛋白水平證實(shí)Pygo2表達(dá)在肝癌組織中較癌旁組織明顯增高（P<0.01）；Pygo2表達(dá)與肝癌細(xì)胞系侵襲轉(zhuǎn)移潛能呈正相關(guān)；Pygo2表達(dá)與肝癌患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。
　　2.通過生長、增殖、克隆形

4、成、裸鼠荷瘤等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，Pygo2表達(dá)下調(diào)后肝癌細(xì)胞系生長、增殖和成瘤能力明顯減弱；通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測、Real-time PCR發(fā)現(xiàn)，Pygo2表達(dá)下調(diào)后Wnt/β-catenin信號通路靶基因表達(dá)降低，尤以c-myc為甚，在mRNA水平Pygo2與c-myc呈正相關(guān)。
　　3.肝癌復(fù)發(fā)患者血清中IL-22水平與Pygo2表達(dá)量呈正相關(guān)，肝癌復(fù)發(fā)組患者血清IL-22水平明顯增高。
　　結(jié)論：