99mTc-PVLA和99mTc-GSA在評價兔肝臟缺血再灌注損傷中的應用.pdf

1、背景：肝臟缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury，IRI）是指缺血缺氧的肝臟在恢復供血供氧后功能非但沒有恢復，反而損傷程度進一步加重的病理現(xiàn)象。肝臟由于其特殊的血供及解剖位置，很少發(fā)生缺血再灌注損傷，但肝癌手術、肝外傷破裂、肝移植及失血性休克等病理情況下肝臟均可能發(fā)生缺血再灌注損傷。如何準確合理地評價缺血再灌注時肝臟的儲備功能，不僅對診斷肝臟疾病大有脾益，而且對評估患者療效和預測預后有很大幫助。臨床常用的

2、評價肝功能的方法，比如肝生化指標、Child-Pugh評分、終末期肝病模型評分、吲哚菁綠(indocyanine green，ICG)排泄試驗等，均有各自的局限性，臨床應用有限，本實驗旨在為評價肝臟 IRI時評價肝臟功能提供一種新思路。去唾液酸糖蛋白受體（asialoglycoprotein receptor，ASGPR）又稱肝凝集素或Ashwell-Morell受體，主要位于肝竇狀間隙側(cè)的肝實質(zhì)細胞表面，此外一些肝外組織也存在少量該受

3、體。當肝臟出現(xiàn)炎癥、硬化或惡性變時，其表面的ASGPR會相應減少。已有文獻證實利用其在肝功能評價及肝臟靶向治療中有很大的潛力。聚（乙烯基-O-B-D-吡喃半乳糖基-D-葡糖酰胺）（Poly(vinylbenzyl-O-b-D-galactopyranosyl-D-gluconamide)， PLVA）和乙二烯三胺五醋酸—半乳糖人血清白蛋白（acid-galactosyl-human serum albumin，GSA）均屬于ASGPR的

4、配體。已有大量文獻報道99mTc-GSA SPECT/CT在評估肝功能時具有重要意義,99mTc-PVLA SPECT/CT僅在評價肝癌方面有報道。尚無文獻報道肝臟IRI與ASGPR水平的關系以及99mTc-GSA和99mTc-PVLA在評價肝臟IRI時肝臟功能中的應用價值。本實驗通過對血生化、免疫組化、99mTc-GSA和99mTc-PVLA SPECT/CT顯像來評價在不同缺血狀態(tài)下和不同再灌注時間點肝臟的功能狀態(tài)及ASGPR的水平

5、，來評估99mTc-PVLA和99mTc-GSA顯像在肝臟缺血再灌注中的應用價值。
　　目的：建立新西蘭大白兔肝臟缺血再灌注損傷模型；了解兔肝臟在不同缺血狀態(tài)和不同再灌注時間點肝臟的功能和ASGPR水平；對比評價99mTc-PVLA和99mTc-GSA SPECT/CT在評估肝臟缺血再灌注中的意義。
　　方法：⑴實驗分組：將32只體重沒有明顯差異雌雄不拘的新西蘭大白兔隨機分為A，B，C和D四組，A：陰性對照組；B組：缺血30

6、min組；C組：缺血45min組；D組：缺血60min組；每組再隨機分成兩組（N=4）：A1,A2;B1,B2;C1,C2;D1；D2,其中A1, B1, C1和D1組行99mTc-GSA SPECT/CT顯像；其余組均行99mTc-PVLASPECT/CT顯像。⑵實驗方法：術前3天（T1），在超聲引導下經(jīng)腹行肝臟穿刺。手術采用改良Pringle法建立兔肝臟缺血再灌注模型：A組僅開腹，不夾閉肝門；B組開腹，夾閉肝門30min；C組開腹，

7、夾閉肝門45min；D組開腹，夾閉肝門60min；松開無損傷血管夾1h后（T2），取肝臟組織，關腹;3天（T3）和7天（T4）后，分別在超聲引導下經(jīng)腹進行肝臟穿刺。所得組織標本進行HE染色，ASGPR及HIF-1α免疫組化檢測。每次麻醉前，均采血測定白細胞和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)水平。穿刺后均進行顯像。每次麻醉前均按照參考文獻和說明書標記相應藥物，分別用薄層色譜法（TLC）和液相

8、色譜法（PLC）測其放射性化學純度和化學純度。處理數(shù)據(jù)描繪出TAC,計算出清除指數(shù)(HH15)，受體指數(shù)（LHL15）和受體修正指數(shù)（modified receptor index,MRI）。手術前后均兔子術前術后的精神狀態(tài)，飲食飲水大小便情況。
　　結(jié)果：A組精神狀態(tài)、進食飲水、排尿排便與術前未見明顯改變；B、C和D組均不同程度改變：精神狀態(tài)變差，運動減少，進食飲水減少，排尿少，尿色黃，排便減少，糞便干、塊??；嚴重程度有重到輕依

9、次為D，C，B;另外D組較其他組有明顯出血傾向。血生化指標：白細胞各組各個時間點及組間均未見明顯差異；ALT組內(nèi)比較： A組各時間點間未見明顯變化，B組：T2>T3=T4=T1, C組：T2>T3>T4=T1, D組：T2>T3>T4>T1(“=”意為二者無明顯差異，“>”意為二者存在顯著差異，且前者均值較大，下同)；組間比較：T1各組間無明顯差異，T2: D>C>B>A;T3:D>C>B=A;T4: D>C=B=A。首先對比分析99m

10、Tc-PVLA和99mTc-GSA的顯像參數(shù)，通過統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)二者的顯像參數(shù)沒有明顯統(tǒng)計學差異；因此后續(xù)分析顯像參數(shù)時就把99mTc-PVLA和99mTc-GSA的顯像參數(shù)總結(jié)在一起比較。組內(nèi)分析：A組：各時間點無明顯差異，B組：T2>T1=T4>T3, C組：T2>T3>T1>T4, D組：T2>T3>T1>T4；組間比較:T1各組間未見顯著差異；T2:D>C>B>A;T3:D>C>A>B;T4:A=B>C>D. LHL15和MRI的

11、變化趨勢基本一致，隨著夾閉時間的延長而降低，術后逐漸恢復，肝門夾閉時間越長恢復越慢。HE染色肝細胞水腫炎細胞浸潤隨著缺血時間的延長而加重，術后1h最重，隨著術后時間延長逐漸恢復。ASGPR在正常肝臟和術后肝臟恢復正常功能初期表達最多，術后1h最低。HIF-1α正常肝臟和恢復正常功能的肝臟幾乎不表達，在術后1h表達最多，隨著術后時間延長逐漸減少。
　　結(jié)論：⑴ASGPR水平在兔肝臟缺血再灌注時降低，且與肝臟損傷程度負相關；⑵99mT