子癇前期患者外周血中Treg細胞向Th17細胞病理性轉化的研究.pdf

1、子癇前期（Pre-eclampsia，PE）仍是全球范圍內(nèi)導致孕產(chǎn)婦和圍生兒高發(fā)病率和高死亡率的重大疾病之一，其發(fā)病率為5％～10%。關于PE病因學的研究層出不窮，但是其確切病因和發(fā)病機制至今仍未被完全闡明，也缺乏有效的預防和治療手段。因此，不斷挖掘PE的病因和發(fā)病機制有重要的意義。
　　近年來，大量的證據(jù)表明母體對胎兒的免疫耐受失衡在PE的發(fā)病中起著重要作用，其中Treg（Regulatory T，Treg）細胞和Th17（T

2、helper17，Th17）細胞之間的免疫平衡對于免疫耐受的維持有重要作用。PE患者外周血和母胎局部均存在著Treg細胞數(shù)量減少和Th17細胞數(shù)量增多的現(xiàn)象，這使得Treg/Th17細胞免疫平衡向Th17細胞偏移。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)Treg細胞還具有可塑性，在適宜的條件下，Treg細胞可以向Th17細胞轉化。CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞是新近發(fā)現(xiàn)的一種獨特的T細胞亞群，該群細胞同時具有Treg細胞和Th17細胞的表型和功

3、能特點。研究發(fā)現(xiàn)Treg細胞向Th17細胞轉化過程中存在著中間型細胞的產(chǎn)生。
　　PE中存在Treg/Th17細胞的免疫失衡，但其是否存在著Treg細胞向Th17細胞轉化目前尚無文獻報道。因此，本研究以CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞為研究切入點，以正常晚孕婦女為對照，檢測PE患者外周循環(huán)中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞的數(shù)量變化，分析CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞與Treg和Th17細胞數(shù)量變化

4、的相關性，同時通過體外研究探討Treg細胞向Th17細胞的病理性轉化的影響因素，以期進一步完善PE的免疫學發(fā)病機制，為PE的治療提供新的線索和思路。
　　第一部分:子癇前期患者外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞的數(shù)量變化研究
　　目的：研究正常晚孕婦女和PE患者外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞的數(shù)量變化。
　　方法：以正常妊娠（Normal pregnancy，NP）婦女為對照組，PE

5、患者為病例組，分別采集NP組（n=40）和PE組（n=23）對象外周血（肝素抗凝），通過密度梯度離心法獲取其外周血單個核細胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs），分別用CD4-FITC、Foxp3-APC和IL17A-PE-Cy7三種單克隆熒光抗體進行標記染色，采用流式細胞（Flow cytometry，F(xiàn)CM）技術檢測兩組外周血中CD4+Foxp3+Treg細胞、CD4+Foxp3+IL

6、-17+中間型細胞和CD4+IL-17A+Th17細胞的數(shù)量變化。
　　結果：與NP組比，PE組外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞百分比明顯增加（P<0.01）；CD4+IL-17A+Th17細胞的百分比也明顯增加（P<0.01）；Treg/Th17比值明顯降低（P<0.01）；CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞占CD4+Foxp3+Treg細胞和Th17細胞的比例均明顯增加（P<0.01）。
　　結

7、論：正常晚孕婦女和PE患者外周血中均存在CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞，且PE患者外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞的數(shù)量較正常晚孕婦女明顯增加。
　　第二部分:子癇前期患者CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞與Treg細胞和Th17細胞數(shù)量變化的相關性研究
　　目的：比較NP組和 PE組外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞與CD4+Foxp3+Treg細胞和CD4+IL-17

8、A+Th17細胞間數(shù)量變化的相關性。
　　方法：根據(jù)第一部分實驗結果，采用Spearman相關性分析對NP組和PE組外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞與CD4+Foxp3+Treg細胞和CD4+IL-17A+Th17細胞的數(shù)量變化進行相關性分析。
　　結果：PE組外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞與CD4+Foxp3+Treg細胞間的數(shù)量變化有負相關性趨勢（r=-0.365），但無明顯統(tǒng)計學意

9、義（P>0.05）；NP組中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞與 Th17細胞間的數(shù)量變化呈正相關性，有統(tǒng)計學意義（r=0.604，P<0.05）；這一相關性在PE組中更為明顯（r=0.803，P<0.01）；此外，NP組中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞占CD4+Foxp3+Treg細胞的比例與Th17細胞數(shù)量變化呈正相關性（r=0.397，P<0.01）；PE患者中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞占CD4

10、+Foxp3+Treg細胞的比例與Th17細胞數(shù)量變化的相關性更為明顯（r=0.741，P<0.01）。
　　結論：外周血中CD4+Foxp3+IL-17+中間型細胞與Th17細胞的數(shù)量變化呈明顯正相關，且在PE中其相關性更為明顯。
　　第三部分:外周血中誘導Treg細胞向Th17細胞病理性轉化的影響因素研究
　　目的：探討外周血中誘導Treg細胞向Th17細胞病理性轉化的影響因素。
　　方法：通過磁珠分選分離出

11、NP婦女外周血中CD4+CD25+Treg細胞，采用含IL-6/IL-23/IL-1β細胞因子的培養(yǎng)基對CD4+CD25+Treg細胞進行體外刺激和培養(yǎng)，以模擬PE中高炎癥環(huán)境，采用熒光定量PCR技術對細胞培養(yǎng)前后與Treg和Th17細胞功能有關的關鍵基因（如Foxp3、IL-10和ROR-γt和IL-17A）的mRNA進行檢測，以探索外周血中誘導CD4+CD25+Treg細胞向Th17細胞病理性轉化的影響因素。
　　結果：用含I