2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:通過檢測動脈粥樣硬化患者血漿、斑塊組織以及泡沫細(xì)胞中miR-155的相對表達(dá)水平,探討miR-155參與動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的分子機制。
  方法:1.應(yīng)用PMA刺激THP-1分化形成巨噬細(xì)胞,隨后用ox-LDL處理,建立動脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞模型,應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)(qRT-PCR)檢測泡沫細(xì)胞中與心血管疾病密切相關(guān)的7個miRNA的表達(dá)水平,篩選出升高最明顯的 miRNA;2.收集 AS患者和正常對照血漿標(biāo)本,利用

2、qRT-PCR技術(shù)檢測miR-155的相對表達(dá)水平;并收集AS患者組織斑塊和正常血管組織,檢測兩組標(biāo)本中 miR-155的相對表達(dá)差異;3.應(yīng)用 PMA刺激THP-1分化形成巨噬細(xì)胞后,用不同濃度ox-LDL處理不同時間,觀察 miR-155的表達(dá)量隨泡沫細(xì)胞沉積脂質(zhì)的量和時間變化而變化的趨勢4.應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將miR-155的mimic或inhibitor轉(zhuǎn)染泡沫細(xì)胞,應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測炎癥因子TNF-α的含量,并用油紅O染色

3、技術(shù)檢測泡沫細(xì)胞沉積脂質(zhì)能力;5.用bioinformatics軟件Miranda、PicTar、TargetScan等預(yù)測miR-155的靶基因,并用雙luciferase reporter assay技術(shù)驗證miR-155直接靶向CARHSP1;6.利用siRNA基因干擾技術(shù)或過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)將CARHSP1 siRNA或CARHSP1過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到泡沫細(xì)胞并檢測 CARHSP1經(jīng)敲低或過表達(dá)后炎癥因子 TNF-α的含量和泡沫細(xì)

4、胞吞脂能力;7.利用western blot技術(shù)檢測miR-155 mimic或inhibitor轉(zhuǎn)染后,泡沫細(xì)胞中miR-155的靶基因CARHSP1及下游炎癥因子表達(dá)情況。8.應(yīng)用TRANSFAC數(shù)據(jù)庫結(jié)果預(yù)測能與miR-155啟動子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子及其結(jié)合位點,應(yīng)用ChIP方法和報告基因技術(shù)和熒光素酶報告基因技術(shù)驗證轉(zhuǎn)錄因子NF-κB可以轉(zhuǎn)錄調(diào)控miR-155的表達(dá)。
  結(jié)果:1.miR-155在泡沫細(xì)胞模型中升高是最明顯的

5、;2.miR-155在AS患者血漿中的相對表達(dá)量明顯高于正常對照;miR-155在AS斑塊組織中的表達(dá)量也明顯高于正常血管組織;3.miR-155在泡沫細(xì)胞中的表達(dá)量隨泡沫細(xì)胞攝食脂質(zhì)的量增多而升高,同時也隨泡沫細(xì)胞吞脂時間的延長而升高;4.miR-155能降低炎癥因子TNF-α的含量并且減弱泡沫細(xì)胞沉積脂質(zhì)的能力;5.Bioinformatics軟件預(yù)測結(jié)果表明CARHSP1是miR-155的靶向基因之一,報告基因技術(shù)驗證miR-15

6、5直接靶向作用CARHSP13’UTR;6.CARHSP1被抑制表達(dá)后能明顯的抑制炎癥因子 TNF-α釋放,而CARHSP1過表達(dá)能促進炎癥因子 TNF-α釋放,其中的機制主要是CARHSP1能促進TNF-α mRNA的穩(wěn)定性;7.在泡沫細(xì)胞中,miR-155通過直接靶向作用于 CARHSP1從而間接抑制炎癥因子 TNF-α的表達(dá)來減緩動脈粥樣硬化炎癥反應(yīng),進一步削弱泡沫細(xì)胞吞脂能力;8.由炎癥因子TNF-α等刺激活化的轉(zhuǎn)錄因子NF-κ

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