廣西某地淡水魚吸蟲囊蚴鑒別及其華支睪吸蟲感染大鼠致肝膽病理和細胞因子改變.pdf

1、目的：
　　了解廣西橫縣魚類吸蟲感染的蟲種，評價形態(tài)學結(jié)合ITS2序列分析鑒定吸蟲囊蚴的有效性。通過對實驗動物感染華支睪吸蟲后給予促癌藥物在短時間內(nèi)（3～6個月）探索華支睪吸蟲可能的誘癌因素。
　　方法：
　　采集橫縣某水庫小魚，采用人工消化法消化收集囊蚴，在解剖鏡下分撿單個囊蚴，按形態(tài)學特征鑒定分類，提取不同形態(tài)囊蚴的DNA后進行ITS序列PCR擴增和測序，獲得的序列在NCBI上進行Blast分析，獲得完整的ITS2

2、序列后并用Mega6.0.6軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹。通過對實驗大鼠灌胃感染華支睪吸蟲囊蚴后，在感染不同時間段對大鼠斷尾采血提取血清，根據(jù)實驗需要和實驗試劑的量取部分血清運用酶聯(lián)免疫法（ELISA）試劑盒檢測血清中細胞色素P4502E1（CYP2E1）、細a胞色素P4502A6（CYP2A6）、糖類抗原199（CA199）、甲胎蛋白（AFP）、脂質(zhì)過氧化物酶(Lipo-xy genase LPO)、白介素6（IL-6）的OD值，利用標準品OD

3、值和相應濃度做出標準線，從而可得到每個檢測出的OD值所對應的相應血清濃度，并做柱狀圖描述不同時間血清物質(zhì)的動態(tài)變化；同時對血清濃度進行統(tǒng)計分析。對實驗大鼠分兩次解剖，每次各解剖每組的一半，分別在感染大鼠100天后、150天后解剖，均取肝臟
　　做H-E病理切片觀察膽管和肝組織的變化，同時對照各組病理切片中病理組織的變化。
　　結(jié)果：
　?。?）廣西橫縣某水庫小型魚類攜帶吸蟲囊蚴的分子生物學初步檢測實驗中，形態(tài)學鑒別表明

4、，橫縣某水庫小魚感染有5種不同形態(tài)的囊蚴；結(jié)合I TS2序列分析表明，這5種囊蚴鑒定為4類不同的吸蟲：華支睪吸蟲（clonor chis sinensis）、鉤棘單睪吸蟲(Haplorchis pumilio)、臺灣棘帶吸蟲(Centrocestus formosanus)和日本全冠吸蟲（Holostephanus dubinini），其中有兩種不同形態(tài)的吸蟲囊蚴分子鑒定均為華支睪吸蟲囊蚴。（2）感染華支睪吸蟲能引起大鼠CYP2E1、I

5、L-6濃度增高，感染華支睪吸蟲大鼠中CA199、AFP、CYP2A6、LPO濃度檢測經(jīng)統(tǒng)計F檢驗P>0.05沒有統(tǒng)計學意義。雖然定量檢測出CA199、AFP、C YP2A6、LPO沒有統(tǒng)計學差異，但并不能說明華支睪吸蟲感染后對這幾個細胞因子沒有影響，有可能是感染時間上還沒有達到，對實驗大鼠分兩次解剖，每次各解剖每組的一半，分別在感染大鼠100天后、150天后解剖，均取肝臟做H-E病理切片觀察肝組織的變化，病理切片結(jié)果表明華支睪吸蟲感染后

6、能引起肝細胞水腫，變性甚至輕微壞死，同時引起膽管匯管區(qū)輕度增寬，小膽管增多，間質(zhì)纖維化，散在淋巴細胞侵潤，且可見有膽管異型增生。已有發(fā)現(xiàn)肝硬化、肝癌和膽管癌的癌前變化，我們不能否認如果病情繼續(xù)發(fā)展可能將引起肝癌的發(fā)生。
　　結(jié)論：（1）在橫縣某水庫小魚中檢出4種吸蟲囊蚴，分別為華支睪吸蟲、臺灣棘帶吸蟲、鉤棘單睪吸蟲和日本全冠吸蟲。僅靠形態(tài)學上鑒定吸蟲囊蚴種類有一定的缺陷，形態(tài)學結(jié)合ITS2序列分析可有效避免這些缺陷。（2）華支睪吸