miR-320在骨髓增生異常綜合征中的表達(dá)分析及其靶基因預(yù)測.pdf

1、1、研究目的:為了探究miR-320在骨髓增生異常綜合征（MDS）中可能的作用機(jī)制，本研究擬以前期利用microRNA芯片技術(shù)在MDS患者中篩選出的特異性microRNA為基礎(chǔ)，篩選出具有顯著表達(dá)差異的miR-320進(jìn)行其表達(dá)水平的檢測。由于miR-320a在腫瘤表達(dá)中更為常見，具有研究意義，利用生物信息學(xué)預(yù)測其直接靶基因，并進(jìn)行GO分析及Pathway分析了解潛在的作用通路，為MDS患者的診斷和治療提供新的理論基礎(chǔ)。
　　2、研

2、究方法:在前期研究的microRNA芯片檢測結(jié)果中篩選出具有表達(dá)差異的miR-320等7個具有表達(dá)差異的基因。利用Real-time PCR檢測技術(shù)在10例MDS初治患者、5例初治MDS轉(zhuǎn)白患者及5例正常對照組中檢測篩選出的microRNA表達(dá)水平的驗證。挑選出具有明顯表達(dá)差異及統(tǒng)計學(xué)意義的microRNA進(jìn)行擴(kuò)大樣本量的Real-time PCR檢測，檢測樣本包括52例初治MDS患者標(biāo)本（31例低危+中危1，21例中危2+高危）、16

3、例初治MDS轉(zhuǎn)白患者標(biāo)本及19例正常對照者標(biāo)本，并分析它們的表達(dá)量與MDS患者臨床病理特征的相關(guān)性。通過生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測具有差異表達(dá)的miR-320a在MDS中的直接靶基因，以及靶基因所富集的基因功能注釋和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。結(jié)合文獻(xiàn)報道篩選出差異表達(dá)的miR-320a在MDS中的潛在靶基因。
　　3、研究結(jié)果
　?、艔那捌谘芯康膍icroRNA芯片檢測結(jié)果中篩選出包括miR-320a和miR-320d在內(nèi)的7個具有表達(dá)差異的m

4、icroRNA。其中，miR-320a和miR-320d在MDS中的表達(dá)上調(diào)。利用Real-time PCR實驗在10例MDS患者、5例MDS轉(zhuǎn)白患者及5例正常對照組中檢測miR-320a和miR-320d的表達(dá)水平，結(jié)果顯示miR-320a和miR-320d的表達(dá)量在MDS各組中均高于在正常對照組，且在中危2+高危組和MDS轉(zhuǎn)白組中的表達(dá)量均比在低危+中危1組中的表達(dá)量高。
　?、评肦eal-time PCR實驗在52例MDS

5、患者、16例MDS轉(zhuǎn)白患者及19例正常對照者中檢測miR-320a/d的表達(dá)水平，結(jié)果顯示miR-320a/d在總的MDS樣本中miR-320a/d的表達(dá)量比正常對照組的表達(dá)量高，是正常對照組的3.18倍（P=1.35×10-6），并且在所有MDS亞組中的表達(dá)均比正常對照組的升高。miR-320a/d在低危+中危1組中的表達(dá)量是正常對照組的1.87倍，在中危2+高危組中的表達(dá)量是正常對照組的3.78倍，在MDS轉(zhuǎn)白組中的表達(dá)量是正常對照

6、組的4.74倍。
　　⑶將MDS患者的骨髓原始細(xì)胞比例與miR-320a/d在MDS中的表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)分析得出，MDS患者骨髓原始細(xì)胞比例與miR-320a/d在MDS中的表達(dá)量呈正相關(guān)。
　?、壤蒙镄畔W(xué)技術(shù)，預(yù)測miR-320a的潛在靶基因，得到81個交集靶基因，結(jié)合文獻(xiàn)報道預(yù)測miR-320a的靶基因為PCDH9。GO分析結(jié)果顯示，miR-320a主要富集于縮短核轉(zhuǎn)錄mRNA poly(A)尾、mRNA分解代謝過程

7、、蛋白結(jié)合作用、核孔復(fù)核體等基因功能注釋。Pathway分析結(jié)果顯示miR-320a主要富集于軸突導(dǎo)向生長、RNA降解、結(jié)直腸癌形成、病毒介導(dǎo)的癌癥形成、溶酶體通路等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。GO分析及Pathway分析結(jié)果表明miR-320a主要通過與mRNA相互作用參與了基因表達(dá)水平的調(diào)控，并在腫瘤的病理機(jī)制中起到重要的作用。
　　4、研究結(jié)論
　?、舖iR-320a/d在MDS患者中表達(dá)量明顯增高，且根據(jù)MDS危險度的增加，其表達(dá)