兔尿源性干細(xì)胞復(fù)合小腸粘膜下層脫細(xì)胞基質(zhì)構(gòu)建組織工程尿道的研究.pdf

1、尿道損傷的病因包括創(chuàng)傷、先天性畸形、感染等，臨床上主要表現(xiàn)為尿道狹窄、閉鎖或缺失，導(dǎo)致排尿功能障礙，甚至可使膀胱、腎臟功能受損，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。尿道狹窄的治療措施包括包括尿道擴(kuò)張、尿道內(nèi)放置支架、尿道內(nèi)切開(kāi)、尿道端-端吻合和尿道成形術(shù)等。其中，尿道端-端吻合術(shù)能解決長(zhǎng)度小于2cm的狹窄。但當(dāng)尿道狹窄長(zhǎng)度大于2cm時(shí)，直接采用狹窄段切除、端-端吻合的常規(guī)手術(shù)方法，會(huì)導(dǎo)致陰莖彎曲、勃起疼痛。因此，對(duì)于長(zhǎng)度大于2cm的尿道狹窄須采用新的

2、尿道替代材料進(jìn)行尿道的修復(fù)與重建。
　　目的:
　　長(zhǎng)段尿道的狹窄或缺失是臨床上泌尿外科醫(yī)生面臨的一個(gè)比較棘手的難題，組織工程技術(shù)是解決這一難題的途徑之一。本研究擬以誘導(dǎo)分化后的尿源性干細(xì)胞(USCs)為種子細(xì)胞，經(jīng)5％過(guò)氧乙酸(PAA)氧化脫細(xì)胞處理的小腸粘膜下層脫細(xì)胞基質(zhì)(SIS)為支架，于體外構(gòu)建成組織工程尿道，為后續(xù)長(zhǎng)段尿道損傷的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究提供尿道修復(fù)材料。
　　方法:
　　通過(guò)無(wú)菌導(dǎo)尿術(shù)收集6只健康成

3、年雄性新西蘭大白兔（體重2.0～2.5kg之間）尿液。采用離心分離法分離尿源性干細(xì)胞，于體外誘導(dǎo)其向尿路上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞方向分化;取健康豬小腸，物理方法獲取小腸粘膜下層，系統(tǒng)比較經(jīng)不同濃度過(guò)氧乙酸(PAA)氧化脫細(xì)胞處理的SIS的體外機(jī)械性能、殘余DNA量、殘余生長(zhǎng)因子含量、電鏡檢測(cè)、切片染色及細(xì)胞粘附性等結(jié)果，確定SIS的最佳制備方法;于體外將誘導(dǎo)分化的上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞作為種子細(xì)胞種以“分層共培養(yǎng)”的方式在動(dòng)態(tài)的環(huán)境下種植于S

4、IS上，通過(guò)組織切片染色等相關(guān)組織學(xué)檢查檢測(cè)細(xì)胞于SIS上的復(fù)合效果。
　　結(jié)果:
　　經(jīng)5％PAA氧化脫細(xì)胞處理的SIS脫細(xì)胞徹底，組織間孔隙多，內(nèi)部疏松，更有利于種子細(xì)胞粘附、滲透、增殖和分化，可作為組織工程尿道的支架材料;與靜態(tài)培養(yǎng)環(huán)境相比，動(dòng)態(tài)培養(yǎng)環(huán)境加強(qiáng)了細(xì)胞在SIS的滲透作用，“分層共培養(yǎng)”使細(xì)胞能夠形成多層的生長(zhǎng)狀態(tài)，以此方式構(gòu)建的組織工程尿道，使尿源性干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的尿路上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞能以類(lèi)似尿道組織細(xì)