骨髓基質(zhì)干細胞復(fù)合小腸黏膜下層體內(nèi)異位成骨的實驗研究.pdf

1、目的:觀察BMSCs復(fù)合SIS構(gòu)建組織工程骨膜的異位成骨能力，探討適宜的組織工程化骨組織的構(gòu)建方式。 方法:取2月齡新西蘭白兔骨髓培養(yǎng)BMSCs，傳至2代，取部分成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)。傳至3代的細胞進行BMSCs膜表面CD分子鑒定和ALP染色。用3代的誘導(dǎo)及未誘導(dǎo)細胞分別與SIS復(fù)合(標記為M2及M1)，以單純SIS作為對照(標記為SIS)。將復(fù)合的膜培養(yǎng)3d和5d后分別進行掃描電鏡觀察。24只2月齡新西蘭白兔隨機分為3組，每組8只。將

2、培養(yǎng)10d后的M1、M2和SIS分別植入每只兔背部的3個肌袋內(nèi)，分別作為實驗1組、實驗2組和對照組(n=8)。術(shù)后4、8、12周作X線、大體標本、組織學(xué)、ALP活性及Ⅰ型膠原和骨鈣素免疫組織化學(xué)染色觀察。 結(jié)果：提取的細胞增殖活躍，傳至第三代膜表面分子鑒定表現(xiàn)為純度為90％以上的BMSCs。復(fù)合培養(yǎng)5d后，電鏡下可見BMSCs在SIS支架上生長、黏附良好。3組動物術(shù)后日?；顒踊菊＃锌跓o紅腫，無死亡。術(shù)后4、8周，M1、M2

3、組的X線、組織學(xué)和免疫組織化學(xué)染色都顯示開始有新骨生成，而SIS組無新骨生成；在各個時間點，M2組的成骨評定高于M1或SIS組(p<0.05)。術(shù)后12周，M1組和M2組新骨生成量逐漸增多，成骨特點更加明顯；M2、M1、SIS組Masson染色切片中成骨量分別為(25.08±0.79)、14.21±0.68)和(10.62±83.56)，組織塊中ALP含量分別為(10.26±0.38)、6.28±0.17)和(1.55±0.21.)，各

4、指標M2組高于M1或SIS組(p<0.05)，M1組高于SIS組(p<0.05)。隨著時間的延長，M2、M1組的成骨量逐漸增加（P<0.05)，而SIS組的成骨量變化不明顯(p>0.05)?！　?結(jié)論:BMSCs與SIS復(fù)合構(gòu)建組織工程骨膜在體內(nèi)有異位成骨作用，而且經(jīng)過成骨誘導(dǎo)的組織工程骨膜成骨作用更加明顯；提取BMSCs進行體外擴增、誘導(dǎo)分化后與SIS構(gòu)建的組織工程骨膜是比較理想的骨移植替代材料。兔肌袋模型是較好的異位成骨模型